IGFBP-5 ekspresyonunun meme kanseri hücre serileri üzerindeki etkilerinin araştırılması - Ergun, Aslı (My University, 2009)
İnsülin benzeri büyüme faktörü bağlayıcı protein-5’ in insan meme kanseri hücre büyümesindeki rolü açık değildir. Meme kanseri hücre serisinde IGFBP-5 ekspresyonunun ne gibi etkilere yol açtığını saptamak için in vitro bir çalışma yapılmasına karar verdik. Normalde IGFBP-5’i eksprese etmeyen MDA-MB-435 meme kanseri hücre serisine hücre kültürü yapıldıktan sonra gen transfeksiyonu yapılarak IGFBP-5 kazandırılması ile stabil klonlar oluşturulmuş, bu klonlardaki IGFBP-5 ekspresyonu western blot ile kontrol edilmiştir. Ayrıca bu hücre serilerine yapılan gen transfeksiyonu gentamisinli seçici medyuma konulması sonrasında ki 2 hafta sonunda kristal viole ile boyanarak koloni oluşturma yeteneğine bakılmıştır. Hücre serilerinde apoptotik etkileri araştırmak için TUNEL yöntemi kullanılmıştır, bu yöntem ile DNA daki zincir kırıkları tesbit edilebilmektedir. Proliferasyon kapasitesini incelemek için; canli kalan hücreleri saptamak amacıyla Tripan blue exclusion boyama yapılarak boyanan ölü hücrelerle boyanmayan canlı hücreler sayılmıştır. Kültür ortamından alınan hücre serilerindeki total protein ekstraksiyonu için mammalian protein extraction reagent kullanılıp, ardından protein miktarı belirlenmiştir. Kısacası transfeksiyon sonrası bu hücre serisinde ki; proliferasyon, koloni oluşturma yeteneği ve apoptotik etkileri araştırılmıştır. Anahtar Sözcükler: IGF, IGF yolağı, IGFBP-5, Meme Kanseri, Apoptoz ve MDA-MB-435

The Effects of IGFBP-5 Expression on Breast Cancer Cell Lines Insuline-like growth factor binding protein-5 (IGFBP-5)’s role in cell growth is not clear. To determine what kind of effects does IGFBP-5 expression have on breast cancer cell line we applied an in vivo research. MDA-MB- 435 breast cancer cell line, which normally does not express IGFBP-5 has cultured then transfected by IGFBP-5 gene and stabil clons have been created. Those clons’ protein levels have been controled by western blotting. Also after transfection those clons were treated by a selective medium with gentamicin. After two weeks, cells dyed with crystal violet to see the colonies. TUNEL protocol has been applied to see the apoptotic effects on cell lines. With this technic, strand breaks at DNA level can be determined. To investigate the capacity of proliferation; we used trypan blue exclusion staining method. We have counted the dyed cells with blue, which were dead and the one’s, which not dyed were alive cells. After taking the cells from culture; we extracted protein by using mammalian protein extraction reagent, then we measured the protein concentrations. Briefly, after transfection we observed proliferation, colony formation ability and apoptosis of this cell line. Key Words : IGF, IGF-axis, IGFBP-5, Breast cancer, Apoptosis and MDA-MB-435
Keywords: Genetik; Kanser; Tıbbi Biyoloji; Tıp