Doğal tuzlu ortamlarda bulunan halofilik bakterilerin izolasyon tekniklerinin araştırılması - Erdoğan, Hikmet (My University, 2001)
Çalışmamızda Tuz Golü'nden (4 adet), gıdalarda salamura yapımında kullanılan tuzlardan (5 adet). Tuzla Organize Deri Sanayii'nde deri tuzlamada kullanılan tuzlardan (4 adet) ve Sivas'taki Cedit Tuzlarından (l adet) toplam olarak 14 adet tuz Örneği toplanarak kimyasal analizi yapılmıştır. Tuz örneklerinde ortalama pH 7.32, toplam senlik 852 F, CaT2 2.31 g/ 1, Mg*: 0.56 g/ L CT 60.79 g/ 1, IIOV 46.27 g/ 1, 804 61.00 g/ 1 ve nem miktarı da %3.01 olarak bulunmuştur. Tuz örneklerinden halofılik bakterilerin ayırımı için değişik içerikli 4 adet sıvı besiyeri kullanılmıştır. Brown (1963) besiyerinde halofılik bakterilerin en kısa sürede ürediği görülmüştür. Tuz örneklerinden halofîlik bakterilerin ayırımı en iyi şekilde membraıı filtre yöntemi ile yapılmıştır. Bir gram tuz örneğinde toplam bakteri sayısı 4.11x10 kob/ g, kırmızı renkli bakteri sayısı 3.92x10 kob/ g ve krem renkli bakteri sayısı 1.23x10' kob/ g olarak belirlenmiştir. Tuz örneklerinden 12 adet saf bakteri susu izole edilmiştir. Bu saf suşların koloni şekillerinin %100'ünün yuvarlak, koloni yüksekliklerinin %82'sinin konveks, %9'unun göbeklenmiş, %9'unun kabarık, koloni kenarlarının %92'sinin tam düz, %8'inin ise dalgalı kenarlı olduğu gözlenmiştir. Ayrıca kolonilerin %42'sİnin parlak, %33'ünün mat, %17'sinin yarı şeffaf ve %8'inin şeffaf olduğu görülmüştür. Koloni boyutlarının 0.5-5 mm arasında değiştiği tespit edilmiştir. Ayırımı yapılan bakteri suşlarmın %25'inin pastel pembe, %17'sinin portakal, %17'sinin kızılımsı koyu kiremit kırmızı, %17'sinîn açık kiremit kırmızı, %8'inin kan kırmızı, %8'inin sarımsı krem ve %8'inin koyu krem renkte koloniler oluşturduğu gözlenmiştir. Bu mikroorganizmalar optimum koşullar altında geliştiklerinde %92'sinin gram negatif reaksiyon verdiği, boylarının genel olarak 2.5x5.0 (im arasında olduğu saptanmıştır. Ayrıca bu suşlann %92'sinin hareketli, düzensiz çomaklar, üçgen, kare ve kok şeklinde hücreler olduğu görülmüştür. Tuz örneklerinden ayırımı yapılan 12 adet bakteri susunun tamamının %3 NaCl içeren besiyerinde üreyemedikleri, %8'inin %lû NaCl içeren besiyerinde, % 100'ün de %15 ve %25 NaCl içeren besiyerinde ürediği gözlenmiştir. Bakteri suşlarınm %100'ünün katalaz pozitif, %83'ünün ise oksidaz pozitif oldukları saptanmıştır. Bu suşların 7 farklı antibiyotiğe karşı duyarlılıkları disk difüzyon metodu ile tespit edilmiştir. Suşların tümünün metisiline (5(.ıg), oksolinik asite (2(.ıg). penisiline (10U), sefadroksile (30(ag), spiromisine (100(.ıg) ve streptomisine (lOjag) karşı dirençli olduğu, %83'ünün ise novobiosine (30(^g) karşı duyarlı oldukları tespit edilmiştir. %25 NaCl içeren Brown (1963) besiyeri üzerine yerleştirilen membran filtreler üzerinde gelişen P 3 ve S ı suşlarınm kolonilerinde erime görülmüştür. Bu koloni erimelerinin, koloniler içerisindeki halofajlardan dolayı olduğu düşünülmüştür fakat bu konuda daha detaylı çalışma yapılması gerektiğine inanmaktayız. Tüm tuz örneklerinin oldukça farklı bakteri cinsleri içerdiği gözlenmiştir. Yapılan çalışma sonuçlarına göre çeşitli tuzlardan ayırımı yapılan bakteri suşlarınm Halobacteriaceae familyasına ait Haloarcula. Halococcns, Halogeomeiricum ve Natronema cinslerine ait Archaebacteria olduğu düşünmekteyiz. In this study, a total of 14 salt samples were collected from Serefliko^hisar Salt Lakes (4), the food preservation industry (5), hide industry (4) and Cedit Saltern in Sivas (1) for chemical analysis and halophilic bacterial content. The average pR total hardness, Ca2 Mg2, Cl, HCOs, SO42~ and water content of the samples were 7.32. 852 F, 2.31 g/ 1, 0.56 g/ 1. 60.79 g/ 1, 46.27 g/ 1, 61 g/ 1 and 3.01% respectively. Four different liquid growth media were used for isolation of extremely halophilic bacteria from the samples. The most rapid growth of these bacteria was s;en in the Brown (1963) medium. The membrane filter technique was found to be tiie best isolation procedure for extremely halophilic bacteria from the samples. The total bacterial number in one gram salt sample was 4.11x10' cfu/ g, of which red and cream bacteria were 3.92x10 cfu/ g and 1.23x10 cfu/ g respectively. A total of 12 pure strains were isolated from samples. The colonial morphology of all strains was circular. The colonial elevation of 82% of the strains was convex, 9% was raised, 9% was umbonate, 92% was entire edge and 8% was irregular wavy. The colonies were composed of 42% glistening, 32% matt, 17% translucent and 8% transparent. The colony size of the strains ranged from 0.5-5 mm in diameter. The colony color of the strains was pastel pink (25%), orange (17%), dark brick red (17%), light brick red (17%), blood red (8%), yellowish cream (8%) and dark cream (8%). Under optimal conditions, 92% of the cells were gram negative. Generally, the bacterial cells were 2.5x5.0 um in size. Most of them were pleomorphic rods, triangles, squares and cocci. None of them showed growth in 3% NaCl containing media, 8% showed growth in 10% NaCl containg media but all strains grew at 15% and 25% NaCl containing media. Positive catalase reactions were seen at all of the strains, while 83% shoxved positive oxidase reactions. These strains were tested by the disk diffusion method for their sensitivity to seven antibiotics with different mode of action. Most of the strains were found to be susceptible to novobiocin (30ug) but resistant to meticilin (5[ag), oxolinic acid (2|.ig). penicillin (lOU), cefadroxil (30ug), spiramycin (100u.g) and streptomycin (10|ug). Colonial lysis of P3 and S1 strains were seen on the membran filter placed onto 25% NaCl Brown (1963) agar. It was thought that the lysis of these colonies were caused by halophages in these colonies but more detailed research should be done in this subject. According to the experiment results, all salt samples contained different genera. It is thought that the isolates belonged to genera Haloarcula, Halococcus, Halogeometricum and aironema of family Halobacteriaceae in domain Archaea.
Keywords: Biyoloji