Genişletilmiş spektrumlu beta-laktamaz enzimini üreten enterobacterales izolatlarına yönelik hızlı tanı kitinin geliştirilmesi - ALTINKANAT GELMEZ, GÜLŞEN; AKSU, MEHMET BURAK; HASDEMİR GÖKBOĞA, MÜNEVVER UFUK (My University, 2023)
Giriş ve Amaç: Antibiyotik direnci günümüzün önemli bir sağlık problemi olup, gram negatif bakterilerde genişletilmiş spektrumlu beta-laktamaz (GSBL) enzimi üretimi, etkin tedaviyi engelleyen önemli bir direnç mekanizmasıdır. Klinikte yaygın olarak görülen GSBL enzimleri; CTX-M, SHV ve TEM gruplarıdır. Enfeksiyon etkeni bakteride GSBL üretiminin erken saptanması, tedavinin doğru yönlendirilmesi açısından çok önemlidir. Rutin laboratuvarda bu süre en az 24 saati bulmaktadır. Bu çalışmada, gram negatif bakterilerde bu enzimlerin üretimini hızlı saptayacak fenotipik bir test geliştirilmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Marmara Üniversitesi Pendik Eğitim ve Araştırma Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarı’nda enfeksiyon etkeni olarak izole edilen 16 Escherichia coli ve 22 Klebsiella pneumoniae çalışmaya dahil edilmiştir. Bakteriler Triton-X (%0,1) ile muamele edilip varsa GSBL enzimlerini açığa çıkartmak üzere hücre çeperleri parçalanmıştır. Bu bakteri süspansiyonları, sefotaksim antibiyotiği (12 mg/mL) ve pH indikatörü olarak fenol kırmızısı (%0,05) içeren tüplere eklenmiştir. GSBL enzimleri varlığında sefotaksim antibiyotiğinin parçalanması ve sonucunda pH’nin asidik yönde değişmesiyle indikatörün renginin kırmızıdan sarı/turuncu’ya dönmesi beklenmiştir. Çalışmanın diğer aşamasında fenotipik testin performansını belirlemek üzere bakterilerde GSBL enzimlerini kodlayan genlerin (blaCTX-M-1, blaCTX-M-2, bla CTX-M-8, bla CTX-M-9, blaSHV-3, blaSHV-18) varlığı altın standart PCR ile araştırılmıştır. Çalışmaya bu enzimleri taşıdığı önceden bilinen kontrol izolatları da dahil edilmiştir. Bulgular: PCR ile 26 izolatta GSBL kodlayan gen saptanırken, 12 izolatta herhangi bir gen saptanmamıştır. Geliştirmeyi hedeflediğimiz fenotipik test, GSBL geni saptanan 26 izolatın hepsinde GSBL enzimini 2 saatte saptamıştır. GSBL geni saptanmayan 12 izolatın hiçbirinde fenotipik testte bu sürede renk değişimi olmamıştır. Sonuç: Testimizin duyarlılığı, özgüllüğü, pozitif prediktif değeri, negatif prediktif değeri %100 olarak bulunmuş olup, bu testin, GSBL üreten mikroorganizmaları 2 saat gibi kısa bir sürede saptamasının, hızla doğru tedavi uygulanmasına ve hasta sağ kalımına çok önemli katkı sağlayacağını düşünüyoruz.

Introduction and Aim: Antibiotic resistance is an important health problem today, and it is an extended-spectrum antibiotic in gram-negative bacteria. Beta-lactamase (ESBL) enzyme production is an important resistance mechanism that prevents effective therapy. common in clinical ESBL enzymes; CTX-M, SHV and TEM groups. Early detection of ESBL production in infectious bacteria, correct treatment very important for orientation. In the routine laboratory, this period takes at least 24 hours. In this study, gram negative bacteria It is aimed to develop a phenotypic test that will detect the production of these enzymes rapidly.Material and Method: Infectious agent in Marmara University Pendik Training and Research Hospital Microbiology Laboratory 16 Escherichia coli and 22 Klebsiella pneumoniae isolated as an isolated are included in the study. Bacteria treated with Triton-X (0.1%) Cell walls were lysed to reveal ESBL enzymes, if any. These bacterial suspensions, cefotaxime antibiotic (12 mg/mL) and phenol red (0.05%) as pH indicator. Cefotaxime in the presence of ESBL enzymes The color of the indicator changes from red to yellow/orange as the antibiotic breaks down and the pH changes in the acidic direction. expected. In the other phase of the study, the ESBL enzymes in bacteria were encoded to determine the performance of the phenotypic test. The presence of genes (blaCTX-M-1, blaCTX-M-2, bla CTX-M-8, bla CTX-M-9, blaSHV-3, blaSHV-18) was investigated by gold standard PCR. this to work Control isolates previously known to contain enzymes are also included.Results: While ESBL encoding genes were detected in 26 isolates by PCR, no gene was detected in 12 isolates. We aim to develop The phenotypic test detected the ESBL enzyme within 2 hours in all 26 isolates with the ESBL gene. 12 isolates with no ESBL gene detected none of them had a color change during this time in the phenotypic test.Conclusion: The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of our test were found to be 100%. Detection of microorganisms producing bacteria in a short time such as 2 hours is very important for rapid correct treatment and patient survival. We think it will contribute.
Keywords: Tıp; Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji; Tıbbi Mikrobiyoloji; Sağlık Bilimleri; Temel Tıp Bilimleri; Medicine; Microbiology and Clinical Microbiology; Medical Microbiology; Health Sciences; Fundamental Medical Sciences; Klinik Tıp (MED); Yaşam Bilimleri (LIFE); Klinik Tıp; Mikrobiyoloji; TIP, GENEL & DAHİLİ; MİKROBİYOLOJİ; Clinical Medicine (MED); Life Sciences (LIFE); CLINICAL MEDICINE; MICROBIOLOGY; MEDICINE, GENERAL & INTERNAL; Genel Sağlık Meslekleri; Patofizyoloji; Temel Bilgi ve Beceriler; Değerlendirme ve Teşhis; Mikrobiyoloji (tıbbi); Dahiliye; Aile Sağlığı; Tıp (çeşitli); Genel Tıp; İmmünoloji ve Mikrobiyoloji (çeşitli); Yaşam Bilimleri; General Health Professions; Pathophysiology; Fundamentals and Skills; Assessment and Diagnosis; Microbiology (medical); Internal Medicine; Family Practice; Medicine (miscellaneous); General Medicine; Microbiology; Immunology and Microbiology (miscellaneous); Life Sciences