İnsan eritrolösemi hücrelerinde tümör nekrozis faktör alfa (tnfα)’nın muskarinik reseptör m3 ekspresyonu, interlökin-8 (cxcl8) ve asetilkolin (ach) salınımındaki rolü üzerine çalışmalar - Kanlı, Zehra (My University, 2016)
Amaç: K562 hücreleri miyeloyid lösemi, normal miyeloid gelişiminde, farklılaşmanın kontrolünde ve gen ekspresyonu çalışmalarında kullanışlı bir model sistemdir. K562 hücre soyu granülosit soyunun erken farklılaşma evresini temsil eder, insan natural killer hücre tayininde hassas hedef hücre olarak kullanılır. K562 hücre çoğalmasında M2, M3 ve M4 muskarinik reseptörlerin rolü olduğu, karbakolün (CCh) serumsuz kültür ortamında hücre çoğalmasını uyardığı gösterilmiştir. Bu çalışmada, nöronal olmayan kolinerjik sistemin sitokinlerle ilişkisini belirlemek üzere, TNFα’ nın, CXCL8 düzeyine, asetilkolin (ACh) sentezine ve M3 muskarinik reseptor ekspresyonuna etkisi incelenmiştir. Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada ATTC’den alınmış K562 hücreleri çoğaltılmıştır. K562 hücreleri 24 saat serumsuz ortamda kültur edildikten sonra TNFα’nın kolinerjik sistem aracılı CXCL8 ve ACh üretimindeki rolünü belirlemek üzere; TNFα (1ng/ ml) ve/ veya farklı konsantrasyonlarda pilokarpine ((M1/ M3agonisti) (1-100 µM) ve/ veya M3 antagonist (4DAMP) (10 nm) ile 24 saat muamele edilen hücrelerde, CXCL8 ve asetilkolin düzeyi ELİSA yöntemi ile belirlenmiştir. Çalışmamızda eritrolösemi hücrelerinde TNFα’nın M3 ekspresyonuna etkisi western emdirimi yöntemi ile belirlenmiştir. Bulgular ve Sonuç: Sonuç olarak, muskarinik reseptör agonisti pilokarpinin düşük konsantrasyonları ACh sentezini uyarmaktadır. Muskarinik reseptör aracılı CXCL8 salınımı M3 antagonisti 4DAMP ile olan inhibisyonu TNFα ile geri çevirilmiştir. Anahtar Sözcükler: Kolinerjik reseptörler, pilokarpin, karbakol, 4DAMP, K562 .

Objective: K562 cells are used as model systems fornormal myeloid, development of myeloid leukemia, control of differentiation and gene expression studies. K562 cell line representearly differentiation stage in granulocyte lienage. It is used fordetection human natural killer cell. M2, M3 and M4 muscarinic receptorshave a role in K562 cell proliferation and carbachol induced cell proliferation in serum free medium. Aim of this study was to examineeffects of nonneuronal acethylcholine onlevel of TNFα, level of CXCL8, synthesis of acethylcholine andto ivestigate agents effects on M3 muscarinic receptorprotein expression. Matherials and metods: K562 cells arepurchased from (ATTC). K562 cells were proliferated.K562 cells cultured 24 hoursin serum free medium. Cells incubated with TNFα (1ng/ ml) and/ or differrent concentration of pilocarpine (M1/ M3 agonist) (1-100µM) and/ or M3 antagonist (4DAMP) (10 µM) 24 hours to detect effectson level of CXCL8, acethylcholine. Effects of TNFα, agonist and antogonist on M3 expression was detected by western blotting method. Results and Conclusion: Consequently, the muscarinic receptor agonist, pilocarpine stimulated the synthesis of acethylcholine by lower concentrations. Muscarinic receptor mediated CXCL8 secretion is inhibited by M3 antagonist, 4DAMP, an effect reversed by TNFα. Key words: Cholinergic receptors, pilocarpine, carbachol, 4DAMP, K562
Keywords: Biyofizik