ING4 geninin aktarılması amacıyla gen taşıyıcı sistemler hazırlanması ve farklı kanser hücre kültürlerinde etkinliğinin gösterilmesi - Karagöz, Uğur (My University, 2019)
Amaç: Tez kapsamında; ING4 genini taşıyan plazmid kullanılarak kanser hücrelerine yönelik tedavi amaçlı non-viral gen taşıyıcı sistemler geliştirilmesi ve çeşitli kanser hücrelerinde etkinliğinin gösterilmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: pcDNA3.ING4 plazmid DNA’sı çoğaltılıp saflaştırıldıktan sonra, bu DNA’yı taşımak için üç farklı taşıyıcı sistem geliştirilmiştir: KLN, Niozom ve PEI-türevi polimerik nanopartiküller. KLN’lerin hazırlanması için sıcak mikroemülsiyon yöntemi kullanılmıştır. Niozom formülasyonu, ince film hidrasyon metodu modifiye edilerek hazırlanmıştır. Hidrofobik olarak modifiye PEI’ler, alifatik lipidler kullanılarak N-açilasyon yöntemi ile sentezlenmiştir. Bulgular ve Sonuçlar: Hazırlanan non-viral taşıyıcı sistemler ING4 gen bölgesini taşıyan plazmid DNA ile kompleksleştirildikten sonra belirtilen hücre kültürlerinde test edilmiş, bu hücrelerde proliferasyona etkisi gözlenmiştir: L929, MCF-10-A, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-436, PC-3, Calu-1. ING-4 için hazırlanan taşıyıcı sistemlerin kanser hücrelerinde proliferasyonu baskıladığı gösterilmiştir. Taşıyıcı sistemlerin kanserli hücreler üzerindeki etkileri karşılaştırılmış, hangisinin daha etkili olduğu belirlenmiştir. Hazırlanan taşıyıcı sistemlerin sağlıklı hücreler üzerine etkisini gözlemlemek amacıyla L929 fare fibroblast hücreleri kullanılmıştır. Transfeksiyonun gözlenebilmesi için, ING-4 ile optimize edilen sistem yeşil floresans protein içeren plazmid ile kompleksleştirilmiştir. Transfeksiyon sonrası floresans görüntüleme yapan mikroskopta temsili fotoğraflar çekilmiş ve flow sitometride yapılan kantitatif analiz ile transfeksiyon etkinliği gösterilmiştir.

Objective: Within the scope of the thesis; we aimed to develop non-viral gene delivery systems for the treatment of cancer cells using the plasmid carrying ING4 gene and demonstrating its efficacy in various cancer cells.Materials and Method: After replication and purification of pcDNA3.ING4 plasmid DNA, three different carrier systems have been developed to transport this DNA: SLN, Niosome and PEI-derived polymeric nanoparticles. Hot microemulsion method was used for the preparation of SLNs. Niosome formulation was prepared by modified thin-film hydration method. Hydrophobically modified PEIs were synthesized by N-acylation method using aliphatic lipids.Results and Conclusion: Non-viral carrier systems were tested in the indicated cell cultures after complexing with ING4 gene carrier plasmid DNA and their effect on proliferation was observed: L929, MCF-10-A, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-436, PC-3, Calu-1. ING-4 carrier systems have been shown to suppress proliferation in cancer cells. The effects of carrier systems on cancer cells were compared for which was more effective. L929 mouse fibroblast cells were used to observe the effect of prepared carrier systems on healthy cells. To observe transfection; system that optimized with ING4 is complexed with the plasmid containing the green fluorescence protein. After transfection, representative photographs were taken on the fluorescence microscope and transfection efficiency was demonstrated by quantitative analysis in flow cytometry.
Keywords: Cell culture; Farmasötik çalışmalar; Hücre kültürü Solid Lipid Nanoparticle; ING4; Katı Lipit Nanopartikül; Niosome; Niozom; PEI; Pharmaceutical aids