Farklı gelişim evrelerindeki yağ hücrelerinde niban geninin antiapoptotik ve lipogenik etkilerinin araştırılması - Çevik, Mehtap (My University)
FARKLI GELİŞİM EVRELERİNDEKİ YAĞ HÜCRELERİNDE NİBAN GENİNİN ANTİAPOPTOTİK VE LİPOGENİK ETKİLERİNİN ARAŞTIRILMASI Gerçek zamanlı hücre monitorizasyon sistemi kullanılarak olgun adipositlerin birtakım stres koşullarını tetiklediği bilinen lineloik asit (LA), stearik asit (SA), etanol ve hidrojen peroksitin farklı dozlarına cevap olarak proliferasyonları incelenmiştir. Bu proliferasyon eğrilerinden faydalanılarak IC50 değerleri tespit edilmiştir. 50, 100, 250, 300, 400, 600, 800 ve 1000 μM hidrojen peroksitin (H2O2) olgun adipositler üzerine olan etkisi 130 saat boyunca gözlemlendi. 1 mM ve 800 μM hidrojen peroksitin 3T3-L1 adipositleri üzerine letal etkili olduğu saptandı. 600, 400 ve 200 μM linoleik asit uygulamasının adiposit proliferasyonuna olan etkisi yaklaşık 120 saat boyunca incelendi ve kontrol grubuna göre 600 μM linoleik asitin adipositler üzerine letal etkili; diğer dozların ise antiproliferatif etkili olduğu saptandı. 250, 150, 100 ve 50 mM etanolün olgun adipositlerin proliferasyonu üzerine olan etkileri yaklaşık 190 saat boyunca incelendi. Uygulanan tüm dozların kontrole göre antiproliferatif etkili olduğu tespit edildi. Bu çalışmalar sonrası proliferasyon verilerine dayanarak her bir ajan için belirli saatlerdeki IC50 değerleri tespit edildi. Bu değerler belirli süreler boyunca hücrelere uygulandıktan sonra hücrelerden Total RNA izolasyonu yapılarak Niban genine ait gerçek zamanlı qPZR (Kantitatif Polimeraz Zincir Raeksiyonu) çalışması yapıldı. 4 saat 300, 5 saat 600 ve 800, 24 saat 600 ve 800 μM hidrojen peroksit uygulaması; 4 saat 50 mM stearik asit ve 24 saat 90 mM etanol uygulamalar sonucu Niban gen anlatımı kontrole göre azaltmış bulunmuştur. 24 saat 480 μM linoleik asit uygulaması ise Niban gen anlatımını kontrole göre arttırmıştır. Ayrıca adipositlerdeki apoptozun inhibisyonun obezite ile ilişkili hastalıkların tedavisinde kullanımının yeni bir terapötik strateji olabileceği hipotezinden yola çıkarak Niban geninin adipogenik ve lipogenik süreçteki rolünün ortaya konulması amacıyla henüz yeni farklılaşmış ancak yağ birikimi çok az olan pre-adipositler ile uzun süre kültüre edilmiş ve aşırı yağ birikimi gözlemlenen olgun adipositlerde Niban gen anlatımı karşılaştırmalı olarak çalışılmıştır. Sonuç olarak olgun adipositlerdeki Niban gen anlatımı kontrole göre çok yüksek; pre-adipositlerdeki ise kontrole göre düşük bulunmuştur. ban Geni, 3T3-L1 Adiposit, Obezite, iCELLigence, Gerçek Zamanlı PZR

INVESTIGATION OF ANTIAPOPTOTIC AND LIPOGENIC EFFECTS OF NIBAN GENE ON DIFFERENT DEVELOPMENT STAGES OF ADIPOCYTES By using real-time monitoring system, as a response to different doses of some stress triggering substances such as linoleic acid (LA), stearic acid (SA),ethanol and hydrogen peroxide, the proliferations of mature adipocytes were examined. IC50 values were determined by utilizing the proliferation curves. 50, 100, 250, 300, 400, 600, 800 and 1000 μM of hydrogen peroxide concentrations were observed on mature adipocytes for 130 hours. 1 mM ve 800 μM hydrogen peroxide was found to have lethal effect on 3T3-L1 adipocytes. 600, 400 and 200 μM linoleic acid application was examined for about 120 hours and 600 μM linoleic acid was found to have lethal effect compared to controls; whereas other doses were found to have antiproliferative effect. 250, 150, 100 and 50 mM ethanol effects were examined for about 180 hours for the proliferation of mature adipocytes. All doses administered were found have antiproliferative effect compared to controls. These IC50 values of each agent for certain times after operation data based on their proliferation were observed. After applying these doses over the cells for certain periods total RNA was isolated from cells, and qPCR was for NIBAN gene was performed. The NIBAN gene expression levels were found to be decreased compared to controls in 4 hours, 300, 600 and 800 for 5 h, 24 h 600 and 800 mm the hydrogen peroxide treatment; 4 hours 24 hours 90 mm 50 mm stearic acid and ethanol administered cells. The 24-hour 480 μM linoleic acid administration was found to increase Niban gene expression compared to control. Also starting from the hypothesis that a new therapeutic strategy for use in the treatment of diseases associated with obesity, inhibition of apoptosis in adipocytes Niban to reveal the role adipogenic and the lipogenic process of gene order has not differentiated new but fat accumulation with little pre-adipocytes has been a long time culture and excessive fat accumulation observed narrative Niban genes in mature adipocytes were studied comparatively. As a result, Niban gene expression was found to be higher in mature adipoctes, and lower in preadipocytes compared to control. ban Geni, 3T3-L1 Adiposit, Obezite, iCELLigence, Gerçek Zamanlı PZR Key Words: Niban Gene, 3T3-L1 Adipocyte, Obesity, iCELLigence, Real Time PCR
Keywords: Biyoloji