Aml12 hepatosit hücre soyunda klopidogrel’in lizozomal aktiviteye olan etkisinin araştırılması - Çarpar, Ece (My University, 2019)
ZET .............................................................................................................................. iii ABSTRACT.................................................................................................................... iv SEMBOLLER ................................................................................................................. v KISALTMALAR ........................................................................................................... vi ŞEKİL LİSTESİ........................................................................................................... viii TABLO LİSTESİ ............................................................................................................ x 1. GİRİŞ ........................................................................................................................... 1 1.1. Genel Bı̇lgı̇ler......................................................................................................... 1 1.1.1. Tromboz.......................................................................................................... 1 1.1.2. Antitrombosit tedaviler ................................................................................... 2 1.1.2.1. Antitrombosit tedavide kullanılan ajanlar ............................................... 3 1.1.2.2. Antiplatelet ajanlar................................................................................... 4 1.1.2.3. ADP reseptör antagonistleri..................................................................... 5 1.1.2.4. Klopidogrel .............................................................................................. 8 1.1.3. Karaciğer ve ilaca bağlı hepatotoksisite ......................................................... 9 1.1.3.1. Sitokrom P450 enzim sistemi ................................................................ 10 1.1.3.2. Klopidogrel’in hepatotoksik etkileri ...................................................... 11 1.1.4. Lizozom ........................................................................................................ 13 1.1.4.1. Lizozomal membran geçirgenliği ve hücre ölümündeki rolü ................ 14 1.2. Amaç ve Önem .................................................................................................... 16 2. MATERYAL VE YÖNTEM ................................................................................... 17 2.1. Kullanılan Kimyasal Madde ve Kitler ................................................................. 17 2.2. Kullanılan Alet ve Cihazlar ................................................................................. 17 2.3. AML12 Hepatosit Hücre Kültürü ........................................................................ 18 2.4. Nötral Kırmızı Sitotoksisite Testi ........................................................................ 19 2.4.1. Nötral kırmızı sitotoksisite test protokolü .................................................... 20 2.4.2. Nötral kırmızı sitotoksisite test sonuçlarının değerlendirilmesi ................... 23 3. BULGULAR VE TARTIŞMA................................................................................. 25 3.1. Bulgular ............................................................................................................... 25 3.2. Tartışma ............................................................................................................... 28 4. SONUÇLAR .............................................................................................................. 32 KAYNAKÇA ................................................................................................................. 33 ÖZGEÇMİŞ iii ÖZET Aml12 Hepatosit Hücre Soyunda Klopidogrel’in Lizozomal Aktiviteye Olan Etkisinin Araştırılması Çalışmamızda kardiyovasküler hastalıkların tedavisinde sık kullanılan antiplatelet ajanlardan biri olan Klopidogrel’in farklı dozlarının AML12 hepatositlerinde lizozomal aktiviteyi ne yönde etkilediği araştırıldı. Çalışmamızda Kopidogrel’in farklı dozlarının lizozomal aktiviteye etkisinin belirlenmesi amacıyla Mus musculus kökenli AML12 hepatositleri kullanıldı ve nötral kırmızı sitotoksisite testi uygulanarak, farklı konsantrasyonlarda uygulanan Klopidogrel dozlarının lizozomal aktivite ve hücre canlılık oranlarına etkisi araştırıldı. 24 saat uygulanan farklı Klopidogrel konsantrasyonlarının AML12 hepatositlerinin lizozomal membran geçirgenliğine olan etkileri 540 ve 690 nm dalga boylarında spektrofotometrik ölçümlerinin yapılması ile belirlendi ve GraphPad Prism 7.04 kullanılarak IC50 değeri 108,5 μM olarak saptandı. 200 μM ve üzeri Klopidogrel konsantrasyonlarının letal etkiye sahip olduğu, doz konsantrasyonu düştükçe hücre canlılık oranının arttığı tespit edildi. 25 ve 50 μM‘lık Klopidogrel konsantrasyonlarının hafif sitotoksisiteye sebep olduğu sonucuna ulaşıldı. 100 μΜ’lık Klopidogrel konsantrasyonunda orta derecede sitotoksisite, 200 μM ve üzeri konsantrasyonlarda ise şiddetli sitotoksisite saptandı. Elde ettiğimiz veriler, kardiyovasküler hastalıkların tedavi edilmesi amacı ile kullanılan Klopidogrel’in düşük dozlarının bile hepatotoksisite ve karaciğer hasarına yol açabileceğini düşündürmektedir. Literatür taramalarımıza göre araştırmamız AML12 hücre soyunda Klopidogrel’in değişen dozlarının lizozomal aktivite ölçümüne göre sitotoksik etkisini gösteren ilk çalışma olma niteliği taşımaktadır

Investigation of the Effects of Clopidogrel in AML12 Hepatocyte Cell Line over Lysosomal Activity In our study, different doses of Clopidogrel, one of the most frequently used antiplatelet agent in the treatment of cardiovascular disease, were investigated to explore the lysosomal activity in AML12 hepatocytes. Neutral red cytotoxicity test was applied to AML12 hepatocytes originated from Mus musculus to determine the effect of different doses of Clopidogrel on lysosomal activity and cell viability. The effects of various Clopidogrel concentrations applied for 24 hours on lysosomal membrane permeability of AML12 hepatocytes were evaluated by spectrophotometric measurements at 540 and 690 nm wavelengths and the IC50 value was found as 108.5 μM using GraphPad Prism 7.04 programme. Clopidogrel concentrations of 200 μM and above were found to have lethal effects, besides the decrease on dose concentration increased cell viability. We conclude that Clopidogrel concentrations of 25 and 50 μM may cause weak cytotoxicity, whereas 100 μM may lead to moderate cytotoxicity. Our data have led us to think that even low doses of Clopidogrel used in the treatment of cardiovascular diseases may result in hepatotoxicity and liver damage in patients with cardiovascular diseases. According to our literature review, our study is a unique research showing the cytotoxic effects of varying doses of Clopidogrel over lysosomal activity in AML12 cell line.
Keywords: AML12; Biology; Biyoloji; Clopidogrel; hepatotoksisite; hepatotoxicity; Klopidogrel; lizozom; Lysosome; Neutral red; Nötral kırmızı