Meme kanseri hücre hattında 4-aminopiridin'in etki mekanizmasının belirlenmesi - İyiol, Pınar (My University, 2020)
Amaç: Bu çalışmada, bir potasyum kanal blokeri olan ve hücre membranpotansiyelini değiştirdiği daha önce yapılan çalışmalarla gösterilmiş olan 4-Aminopiridin’in (4-AP) yol açtığı hücre ölümü mekanizmasının araştırılmasıhedeflenmektedir.Gereç ve yöntem: Çalışmada, östrojen pozitif MCF-7 (ATCC HTB- 22) ve kontrololarak fibroblast L-929 (ATCC CCL-1) hücre hatları kullanılmıştır. z-vad-fmk,sikloheksimid (CHX) ve 2-Aminoetoksidifenil borat‘ın(2-APB) ayrı ayrı ve 4-AP ilekombine kullanımları sonucu canlılık üzerinde meydana getirdiği değişimler tripanmavisi ile hücreler sayılarak belirlenmiştir. Hücre içi kalsiyum (Ca +2 ) değişimleriFura-2 AM floresan boya ile, membran potansiyeli değişimleri DiBAC 4 (3) ilefloresan spektrofotometrede belirlenmiştir. İstatistiksel değerlendirmelerde tek yönlüANOVA yöntemi kullanılmıştır ve p değeri 0,05‘ten küçük değerler anlamlı kabuledilmiştir.Bulgular: 4-AP uygulamasından sonra hücrelerde vakuol oluşumu gözlendi. 4-APuygulamasından 1 saat önce ayrı ayrı z-vad-fmk, CHX ve 2-APB ile ön işleme tabitutulan hücrelerde MCF-7 ve L-929 hücre hatları için sağ kalım artmıştır. Kaspazinhibitörü ile ön tedavi sonrası canlılık artışı z-vad-fmk apoptotik hücre ölümüneişaret ederken, paraptoz inhibitörü CHX ile ön tedavi sonrası sağkalımda artış vevakuol oluşumu paraptotik hücre ölümüne işaret etmektedir. 4-AP, beklendiği gibihücre içi Ca +2 'da artışa neden oldu. IP3 reseptör bloke edici 2-APB ile önmuameleden sonra hücre içi Ca +2 miktarında azalma bulundu ve bu sonuç, sağ kalımartışıyla ilişkilendirildi. 4-AP, her iki hücre hattında da depolarizasyona neden oldu.Sonuçlar: Meme kanseri hücre hattında 4-AP uygulaması, apoptoz öncesi paraptotiksürecin başlaması ve bu sürecin apoptozu tetiklemesi ile hücre ölümününgerçekleştiğini düşündürmektedir.

Objective: In this study, it is aimed to investigate the mechanism of cell deathcaused by 4-Aminopyridine (4-AP), which is a potassium channel blocker and hasbeen shown in previous studies to change cell membrane potential.Material and method: Estrogen positive MCF-7 (ATCC HTB-22) and fibroblast L-929 (ATCC CCL-1) cell lines were used in the study. The changes caused by z-vad-fmk, cycloheximide (CHX) and 2-aminoethoxydiphenyl borate (2-APB) separatelyand in combination with 4-AP were determined by counting cells with trypan blue.Intracellular calcium (Ca +2 ) changes were determined with Fura-2 AM fluorescentdye, membrane potential changes with DiBAC 4 (3) in fluorescencespectrophotometer. Statistical evaluations were made using the one-way ANOVAmethod, and values with a p value less than 0.05 were considered significant.Results: Vacuole formation was observed in the cells after 4-AP application.Survival was increased for MCF-7 and L-929 cell lines in cells pretreated with z-vad-fmk, CHX and 2-APB separately for 1 hour before 4-AP administration. Viabilityincrease upon pre-treatment with caspase inhibitör z-vad-fmk suggested apoptoticcell death while increased survival after pretreatment with paraptosis inhibitör CHXand vacuole formation suggested paraptotic cell death. 4-AP caused an increase inintracellular Ca +2 as expected. A decrease in the amount of intracellular Ca +2 wasfound upon pretreatment with IP 3 receptor blocker 2-APB which correlated with anincrease in survival. 4-AP caused depolarization in both cell lines.Conclusions: 4-AP application in breast cancer cell line suggests that cell deathoccurs with the initiation of the paraptotic process before apoptosis and this processtriggers apoptosis.
Keywords: 4-Aminopiridin; 4-Aminopyridine; Biophysics; Biyofizik; Breast neoplasms; Calcium; Health; Kalsiyum; Membrane Potential; MembranPotansiyeli Breast Cancer; Meme Kanseri; Meme tümörleri; Sağlık