İndol-3-karbinol'ün in-vitro mikrozomal metabolik reaksiyonlarının incelenmesi

Abstract

ndol-3-karbinol, cruciferous sebzelerinde (lahana familyası) bulunan temel antikanserojen maddelerden biridir. Bu bileşik, adı geçen familyaya ait karnıbahar, brokoli, lahana gibi sebzelerin sıkılması veya pişirilmesi sonucunda açığa çıkar. ndol- 3-karbinol vücuttaki doğal detoksifikasyon enzimlerinin antioksidanı ve potent uyarıcısıdır. Literatür araştırmalarımız sonucu indol-3-karbinol ile ilgili önemli ölçüde farmakolojik aktivasyona ait çalışmalar ve in vivo biyolojik çalışmalar gözlenmiştir. Mevcut çalışma, bu bileşiğin oksidatif in vitro mikrozomal metabolizmasına ait herhangi bir bulguya rastlanmaması sonucu planlanmıştır. Bu nedenle ilk önce indol-3-karbinol ve potansiyel oksidatif metabolizma ürünleri olan indol-3-asetik asit ve indol-3-aldehit’in ayırımlarını sağlayan isokratik, oldukça basit, hızlı ve su miktarının asetonitrile göre önemli miktarda fazla tutulduğu (70:30,h/ h) nispeten ucuz bir zıt faz yüksek basınçlı sıvı kromatografisi sistemi geliştirilmiş ve daha sonra indol-3-karbinol ve indol-3-aldehit deney hayvanlarının karaciğerlerinden hazırlanan mikrozomlarla, NADPH varlığında inkübasyona tabi tutulmuştur. Diklorometan ekstraksiyonu sonucu indol-3-karbinolün karşılık gelen aldehit ve karboksilli asit türevlerine dönüştüğü, elde edilen kromatogramlardan ve standart ve metabolik ürünlere ait ultraviyole spektrumlarından anlaşılmaktadır. Ancak indol-3-aldehit metabolizması sonrası bu bileşik asit ve karbinol türevlerine dönüşmemiştir. Ayrıca indol-3-karbinol brokoli bitkisinden kloroform ile ekstrakte edilmiş ve bileşik geliştirilen HPLC sisteminde p-kloroasetanilid internal standardı ile tayin edilmiştir. ndol-3-karbinol, in-vitro mikrozomal metabolizma, oksidasyon 1

The investigation of in vitro microsomal metabolic reactions of indole-3- carbinol Indole-3-carbinol is one of the main anticarcinogen substances in cruciferous vegetables (cabbage family). This compound is produced by squeezing or cooking the vegetables related to this family ie brocoli, cabbage. Indole-3-carbinol is an antioxidant and potent stimulant of natural detoxification enzymes in the body. Following our literature search a number of studies related to its pharmaceutical activation and in vivo biological work were observed. This present study was planned since surprisingly no study related to in vitro microsomal metabolism was found in the literature. In the present study, an isocratic, highly simple, fast and somehow cheap (with a higher water percentage compared to acetonitrile ie.70:30,v/ v) reverse phase high pressure liquid chromatography sistem was first established to separate the supstrate and indole-3-carbinol’s potential oxidative metabolites ie indole-3-carboxylic acid and indole-3-aldehyde. Then the substrates i.e. indol-3-carbinol and indole-3-aldehyde incubated with rat liver microsomes fortified with NADPH. Following dichloromethane extraction, it was observed that indol-3-carbinol was metabolised into the corresponding acid and aldehyde which was detected by chromatograms and ultraviole spectra of standards and metabolites. However, following the in vitro metabolism of indole-3- aldehyde, this compound did not give any acid and carbinol derivative as metabolites. In addition, indole-3-carbinol was extracted from brokoli plant by chloroform. This extract was evaluated by HPLC system developed by using an internal standard of p- chloroacetanilide and a trace amount of indole-3-carbinol was detected. Key words: Indole-3-carbinol, in-vitro microsomal metabolism, oxidation