Ankilozan spondilitli hastalarda eksozom profilinin incelenmesi

Abstract

Amaç: Bu çalışmada, hücre-hücre iletişiminin temel komponentleri olan eksozomların kronik, sistemik ve inflamatuvar bir hastalık olan ankilozan spondilit (AS) patogenezindeki olası rolü ve bu eksozomların kökeni araştırılmıştır. Gereç ve Yöntem: 10 AS hastası ve 10 sağlıklı kontrolden elde edilen serum içerisindeki eksozomlar, önce fiziksel özelliklerinden yararlanılarak Izon qEV2/ 35 nm kolonları ile, ardından biyokimyasal özelliklerinden yararlanılarak CD9, CD63 ve CD81 antikorlarıyla kaplı 3 µm çapındaki manyetik boncuklar ile izole edilmiştir. Filtratın saflığını değerlendirmek için BCA ve ELISA testleri yapılmıştır. Eksozom varlığını doğrulamak, eksozomların kökenini ve sitokin profilini ortaya çıkarmak için flow sitometri analizi ile eksozom yüzey belirteçleri karakterize edilmiştir. Eksozom konsantrasyonu ile ilgili flow sitometri bulgusunu desteklemek amacıyla, eksozom konsantrasyonu ile AS arasındaki ilişki BCA yöntemi ile test edilmiş ve sonuçlar karşılaştırılmıştır. Bulgular: Flow sitometri analizinde, AS grubunun CD86+TSG101+ ve CD3+TSG101+ eksozom yüzdeleri kontrol grubuna göre anlamlı derecede yüksekti (p<0.05). CD3+IL17+ ve CD3+IFNg+ ile CD86+TNFa+ ve CD86+IL12(p35)+ eksozom yüzdeleri açısından AS ve kontrol grupları arasında anlamlı fark bulundu (p<0.01). Sonuç: AS sürecinde T hücre türevli eksozomların oranı ve bu eksozomların memranındaki IL-17A ve IFNg sitokin ekpresyon seviyeleri ile makrofaj türevli eksozomların ve bu eksozomların membranındaki TNFa ve IL-12(p35) sitokin ekspresyon seviyeleri artmıştır. Fakat eksozom profili AS seyrine göre değişmemiştir.

Objective: In this study, the possible role of exosomes, which are the main components of cell-cell communication, in the pathogenesis of ankylosing spondylitis (AS), a chronic, systemic and inflammatory disease, and the origin of these exosomes were investigated. Material and Methods: Exosomes in serum obtained from 10 AS patients and 10 healthy controls were first isolated with Izon qEV2/ 35 nm columns using their physical properties, and then with 3 µm diameter magnetic beads coated with CD9, CD63 and CD81 antibodies using their biochemical properties. BCA and ELISA tests were performed to evaluate the purity of the filtrate. Exosome surface markers were characterized by flow cytometry analysis to confirm the presence of exosomes and reveal the origin and cytokine profile of exosomes. In order to support the flow cytometry finding about exosome concentration, the relationship between exosome concentration and AS was tested with the BCA method and the results were compared. Results: In FC analysis, CD86+TSG101+ and CD3+TSG101+ exosome percentages of AS group were significantly higher than control group (p<0.05). A significant difference was found between AS and control groups in terms of CD3+IL17+ and CD3+IFNg+, CD86+TNFa+ and CD86+IL12(p35)+ exosome percentages (p<0.01). Conclusion: In the AS process, the ratio of T cell-derived exosomes and IL-17A and IFNg cytokine expression levels in the membrane of these exosomes, the ratio of macrophage-derived exosomes and TNFα and IL-12(p35) cytokine expression levels in the membrane of these exosomes increased. However, the exosome profile did not change according to the course of AS.