Atopik çocuklarda BCG aşısının T yardımcı hücre stokin profili üzerine etkisi

Abstract

IgE aracılıklı Tip 1 aşırı duyarlılık reaksiyonları (ADR), başta astım olmak üzere birçok allerjik hastalığın temelini oluşturmaktadır. Atopik olarak adlandırılan ve allerjenlere karşı aşırı hassasiyet gösteren bireylerde meydana gelen Tip 1 ADR'nin patogenezinde birçok hücre ve molekül rol oynamaktadır. Yapılan incelemeler bu moleküller arasında en önemlisi olan İmmünglobulin E (IgE)'nin sentezini yardımcı T lenfositlerin (Th) alt grupları olan Th1 ve Th2'lerden salgılanan sitokinlerin düzenlediğini göstermiştir. Buna göre Th1 hücrelerinden salgılanan sitokinler IgE sentezini baskılarken Th2 sitokinleri B lenfositlerini IgE sentezleyecek yönde uyarmakta ve atopi tablosunun oluşumuna yol açmaktadır. Yapılan bu tez çalışmasında BCG aşısının atopik çocuklardaki Th hücrelerinin sitokin sentezi üzerine olan etkisi gen ekspresyonu düzeyinde incelenmiştir. Buna göre atopik çocuklardan izole edilen lenfosit hücreleri kültür ortamında çoğaltılmış, bu hücrelerden elde edilen RNAlar cDNA'ya dönüştürülmüştür. Bu cDNA örnekleri Th1 hücresi sitokinleri olan İnterlökin-2 (IL-2) ve İnterferon-g (IFN-g), Th2 hücresi sitokinleri olan İnterlökin-4 (IL-4) ve İnterlökin-5 (IL-5)'e özgü primerler kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemiyle çoğaltılmıştır. PCR ürünleri daha sonra agaroz jel elektroforezi ve dot blot hibridizasyon yöntemleriyle incelenmiştir. Aynı işlemler hastalar BCG ile aşılandıktan sonra da yapılmış ve aşılama öncesi ile sonrası elde edilen değerler karşılaştırılmıştır. Yapılan karşılaştırma sonucu aşılama öncesi Th1 sitokinleri ekspresyona uğramayan hastalarda aşılamadan sonra yüksek düzeylerde IL-2 ve IFN-g sentezlendiği gözlenmiştir. Th2 sitokinlerinden IL-4 aşılama öncesi çok anlamlı sonuçlar vermezken IL-5 BCG'nin etkisiyle önemli miktarda azalma göstermiştir. Elde edilen bu veriler, BCG aşısının atopik hastalardaki Th2 hücre populasyonunu baskılayıp Th1 hücre populasyonunu arttırdığını ve dolayısıyla atopi tablosuna yol açan IgE sentezinin engellendiğini ortaya koymuştur. IgE mediated Type 1 hypersensitivity reactions make up the basic pathology for many allergic disorders especially asthma. Many cells and molecules are involved in the pathogenesis of Type 1 hypersensitivity reaction which occurs in atopic individuals who show increased sensitivity against allergens. Studies have revealed that the synthesis of the most important molecule among these, IgE, is regulated by Th1 and Th2 , the subgroups of T helper cells (Th). Cytokines secreted from Th1 suppress IgE synthesis while Th2 cytokines stimulate B lymphocytes for IgE synthesis. In this study the effect of BCG vaccination on cytokine synthesis by Th cells in atopic children is analyzed at the level of gene expression. Lymphocytes isolated from atopic children's peripheral blood before vaccination with BCG, are cultured and mRNA extracted from these is converted to cDNA. Using primers specific for DNA sequences of Th1 cytokines IL-2 and IFN-g and of Th2 cytokines IL-4 and IL-5 these cDNA samples are amplified with polymerase chain reaction. Then the PCR products are run in agarose gel electrophoresis and analyzed with dot blot hybridization. Same procedures are repeated after BCG vaccination and the results are compared. The expression of Th1 cytokines IL-2 and IFN-g is found to be high after BCG vaccination, where there was no expression before the vaccination. Of the Th2 cytokines IL-5 showed a significantly decreased expression after vaccination, whereas the results about IL-4 expression are not significant. These data obtained show that BCG vaccination suppresses Th2 cell population in atopic patients whereas Th1 cell population is increased and thus the IgE synthesis leading to atopy is prevented.