K562 hücre soyunda muskarinik reseptör alttiplerinin ekspresyonu

Abstract

Bu çalışmada insan eritrolösemi hücre soyu olan K562 hücrelerinde Ters Traskriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu kullanılarak muskarinik reseptör alttiplerinin ekspresyonu incelenmiştir. K562 insan eritrolösemi hücre soyunda muskarinik reseptör alttiplerinin ekspresyonunu incelemek için, K562 insan eritrolösemi hücreleri %10 fetal dana serumu içeren RPMI-1640 kültür ortamında %5 CO2 varlığında çoğaltılmıştır. Çoğaltılan hücreler PBS ile yıkandıktan sonra toplam RNA, guanidyum izotiyosiyonat-fenol-kloroform ekstraksiyonu yöntemi ile izole edilmiştir. İzole edilen RNA' lardan m1, m2, m3, m4 muskarinik reseptör alttipleri için uygun primerler kullanılarak Ters Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu (TT-PZR) yöntemi ile uygun bölgeler çoğaltılmıştır. TT-PZR yöntemi ile elde edilen ürünler %2' lik agaroz jel elektroforezinde yürütüldükten sonra UV altında görüntü alınmıştır. K562 insan eritrolösemi hücre soyunda m2, m3 ve m4 muskarinik reseptörlerinin ekspresyonunun varlığı belirlenmiştir. m1 muskarinik reseptör ekspresyonunun olmadığı gösterilmiştir. MUSCARINIC ACETYLCHOLINE RECEPTOR SUBTYPES EXPRESSION IN K562 CELLS

This study aimed to determine muscarinic receptor expression in K562 cells.The erythroleukemia (chronic myeloid leukemia) cell line K562 was grown in suspension using RPMI-1640 medium supplemented with %10 fetal calf serum at 37 ° C in 5% CO2 humidified atmosphere. The cells were washed with PBS buffer. Total RNA was isolated by the guanidium thiocyonate-phenol-chloroform extraction method. RNA samples were analysed by RT-PCR. Analysis of PCR reactions was performed on 2% agarose gels stained with ethidium bromide. RT-PCR analysis showed that m2, m3 and m4 muscarinic receptor subtypes were expressed in K562 cells. No expression of mRNA for m1 muscarinic receptor subtype was observed in K562 cells.