Brinzolamid ilaç etken maddesinin in vitro salımı incelemesi için HPLC metodu optimizasyonu ve validasyonu

Abstract

Brinzolamid, karbonik anhidraz II'ye özel afinitesi olan bir sülfonamid ve karbonik anhidraz inhibitörüdür. Bu çalışmada, Brinzolamid içeren oftalmik formülasyonların in vitro salım profillerini belirlemek için geliştirilen HPLC yöntemi optimize edilmiş ve validasyonu tamamlanmıştır. Franz difüzyon hücresi ile yapılan deneyler, yöntemin yüksek tekrarlanabilirlik, doğruluk ve seçiciliğe sahip olduğunu göstermiştir. Metodun geliştirilmesi sürecinde membran seçimi, alıcı ortamın bileşimi ve numuneleme parametreleri kritik değişkenler olarak değerlendirilmiştir. GH Polypro (Pall) membran ile düşük varyasyon katsayıları elde edilmiştir. pH 7,4 fosfat tamponu ve asetonitril (%70:30) alıcı ortam olarak seçilmiş ve sink koşulları sağlanmıştır. ICH-Q2 (R1) ve USP-1225 kılavuzlarına uygun yapılan validasyon çalışmaları, geri kazanım oranlarının %98-102 aralığında olduğunu ve yöntem doğruluğunun yüksek olduğunu göstermiştir. Çalışma aralığı 0,0001-0,2 mg/ mL olup doğrusallık sağlanmıştır (R² > 0,9997). LOD ve LOQ değerleri sırasıyla 0,00003 mg/ mL ve 0,0001 mg/ mL olarak hesaplanmıştır. Tekrarlanabilirlik ve ara kesinlik çalışmaları, yöntemin farklı analist, cihaz ve kolon koşullarında tutarlı sonuçlar verdiğini kanıtlamıştır. Geliştirilen yöntem, çevre dostu olup daha az kimyasal atık üretmektedir. Franz difüzyon hücresiyle uyumluluğu, farmasötik test standartlarına uygunluğunu desteklemektedir. Önceki yöntemlere kıyasla, geliştirilmiş metodoloji ile 45 dakikada %80'in üzerinde ilaç salımı elde edilmiştir. Yöntemin kombinasyon ürünler ve diğer oftalmik aktif maddeler için de uyarlanabilir olduğu düşünülmektedir.

Brimonidine is an alpha-2 adrenergic receptor agonist commonly used in ophthalmology to reduce elevated intraocular pressure. In this study, a High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) method was optimized and validated to determine the in vitro release profiles of ophthalmic formulations containing Brinzolamide. Experiments conducted using Franz diffusion cells demonstrated that the method possesses high repeatability, accuracy, and selectivity. During the method development process, critical variables were identified, including membrane selection, composition of the receptor medium, and sampling parameters. Low coefficient of variation values were achieved using GH Polypro (Pall) membranes. Phosphate buffer at pH 7.4 and acetonitrile (70:30) were selected as the receptor medium, ensuring sink conditions were met. Validation studies conducted in accordance with ICH-Q2 (R1) and USP-1225 guidelines indicated that the recovery rates ranged from 98% to 102%, demonstrating high method accuracy. The working range was established between 0.0001 and 0.2 mg/ mL with linearity achieved (R² > 0.9997). The limits of detection (LOD) and quantitation (LOQ) were calculated to be 0.00003 mg/ mL and 0.0001 mg/ mL, respectively. Repeatability and intermediate precision studies provided evidence that the method yields consistent results across different analysts, instruments, and column conditions. The developed method is environmentally friendly, producing less chemical waste. Its compatibility with Franz diffusion cells supports its compliance with pharmaceutical testing standards. Compared to previous methods, the improved methodology achieved over 80% drug release within 45 minutes. It is also believed that the method can be adapted for combination products and other ophthalmic active ingredients.