Bazı substitüe alifatik-aromatik amidlerin ve hidroksamik asitlerin in vitro mikrozomal metabolizmaları

Abstract

Bu çalışmanın birinci bölümünde benzanilit ve N-etilbenzamit substratlarının ve karşılık gelen hidroksamik asit metabolitlerinin sentezi yapıldı. Amitlerin sentezinde primer amin, ilgili benzoil klorür ile Schotten Baumann reaksiyonu kullanılarak elde edildi. Hidroksamik asit, primer aminin oksidasyonu ile elde edilen hidroksilamin ara ürününün ilgili benzoil klorür ile reaksiyonu sonucu elde edildi. Çalışmanın ikinci bölümünde, hazırlanan amitlerin, karşılık gelen hidroksamik asit ve hidrolitik ürünlerinden bir zıt faz yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemi ile ayırımları için ACN:Bidistile su (50:50,h/ h) hareketli fazı ve C18 kolon kullanılarak, 254 nm de UV dedektörle bir metod geliştirildi. Çalışmanın üçüncü bölümünde, her iki substrat, kalsiyum klorür çökeltme metodu ile daha önceden hazırlanmış sıçan karaciğer mikrozomal preparatları ile NADPH varlığında 30 dakika süreyle inkübe edilip daha sonra inkübasyon karışımı, diklorometan ile sulu fazdan ekstre edildi ve diklorometanın azot gazı altında buharlaştırılmasıyla metabolik ekstreler elde edildi. Çalışmanın son bölümünde, elde edilen metabolik ekstrelerin, ikinci bölümde geliştirilmiş olan zıt faz HPLC metodunu kullanarak analizleri yapıldı. Benzanilit metabolizması sonrası anilin metaboliti saptandı. Hidroksamik asit hem test hem de kontrol tüplerinde görüldüğünden non-enzimatik oluştuğu bildirildi. N-Etil benzamit metabolizması sonucu HPLC-UV ve HPLC-MS teknikleriyle karşılık gelen hidroksamik asit metaboliti tespit edilememiştir.

In vitro Microsomal Metabolism of Some Substitue Aliphatic-Aromatic Amide and Hydroxyamic acid In the first part of the study, benzanilide and N-ethylbenzamide substrates and their corresponding hydroxamic acid metabolites were prepared. In the amide synthesis, primary amine was obtained by Schotten Baumann reaction of corresponding benzoyl chloride. Hydroxamic acid was prepared by the reaction of hydroxylamine intermediate with benzoyl chloride. In the second part, a method for the separation of amides with hydroxamic acid and hydrolitic products was developed with a reverse phase high pressure liquid chromatography (HPLC) using a mobile phase of ACN:bidistilled water (50:50,v/ v) and a C18 column with uv detection at 254 nm. In the third part of the study, both substrates were incubated with rat liver microsomal preparations, which were prepared previously by calcium chloride precipitation method, fortified with NADPH and the incubates were extracted into dichloromethane and evaporated to dryness under a stream of nitrogen gas. Metabolic extracts were obtained. Finally, the metabolic extracts were analysed by the reverese phase HPLC method developed and following benzanilide metabolism, aniline was detected as a metabolite. Since the corresponding hydroxamic acid was seen in both test and control tubes, it is suqqested that it formed non-enzymatically. Following N-ethyl benzamide metabolism, no hydroxamic acid metabolite was detected with HPLC-UV and HPLC-MS techniques.