17B-estradiol’ün endotel hücrelerinde etkili olduğu genlerin ekspresyon düzeyleri

Abstract

Son yıllarda yapılan birçok deneysel ve epidemiyolojik çalışmalarla, postmenoposal kadınlarda, estrojen replasman tedavisinin kardiovasküler hastalıklara karşı koruyucu etkilerinin güçlü kanıtları bulunmuştur. Damar endoteli ise estrojen için potansiyel olan hedeflerden biridir. Damar endotelinin, kan ile damar duvarı arasında zarf gibi kontrollü bir engel olarak durması ve PGI2, EDRF (NO) ve ET-1 gibi bazı aktif maddeleri salgılaması endotel tabakasının vazoregülatör olarak görev yapabilmesini sağlamaktadır. Ayrıca, uzun süreli estrojen ile uyarılan endotel hücrelerinde eNOS'un ekspresyonunun arttığı gözlemlenmiştir. Bununla birlikte, literatürdeki bazı çalışmalar, yüksek tansiyon ve aterosiklerozun patogenezinde rol oynayabileceğini göstermektedir. Yapılan son çalışmalarda, estrojenin uyaran olarak verildiği endotel hücrelerinde, ET-1 seviyesinin etkilendiği veriler arasındadır. Yapılan bu çalışmada 17b-estradiol'ün (E2) endotelin-1 geni üzerindeki etkisinin nitrik oksit ile ilişkisi araştırılmıştır. Bu amaçla, insan göbek kordonu endotel hücrelerinden(HUVEC) üç kültür hazırlanmıştır. Birinci kültür hiç uyarılmadan 48 saat inkübe edilmiştir. İkinci kültür 10-7M E2 ile uyarılmıştır ve 48 saat inkübe edilmiştir. Üçüncüsü ise 10-7M E2 uyaranı ile 24 saat ardından 1mM L-NAME uyaranı ile 24 saat inkübe edilmiştir. Bunu takiben hücrelerden total RNA izolasyonları yapıldı. Northen Blot tekniğiyle naylon membrana aktarılan total RNA'lar [a-32P] dCTP işaretli ET-1 ve GAPDH cDNA probları ile hibridizasyona sokuldu ve X-ray filminde görüntülendi. Daha sonra densitometrik ölçümleri yapılan örneklerde gen ekspresyonları karşılaştırıldığında, 10-7M E2 ile uyarılan kültürdeki ET-1 de uyarılmayana göre %48'lik bir azalmanın, 10-7M E2 ve L-NAME ile uyarılan kültürdeki gen ekspresyonunun uyarılmayana göre %12'lik azalmanın olduğu görülmektedir. Yapılan bu tez çalışmasının sonuçları, 17b-estradiol'ün endotelin-1 geni üzerindeki etkisinin nitrik oksit ile ilişkisini ve bu yoldaki aracılığının gösterilmesi açısında önemli bir bulgudur. In recent years, many experimental and epidemiological studies have found the strong evidence of the protective effects of the treatment of oestrogen replacement against the cardiovascular diseases, on post-menopausal women. In fact, vascular endothelium is one of the most potential targets of the estrogen. The location of the vascular endothelium between blood and vascular wall, as an envelope-like controlled barrier, and, its secretion of some active substances such as PGI2, EDRF (NO) and ET-1, enable the endothelium layer to function as vasoregulator. Furthermore, the expression the eNOS has been observed to increase in the endothelium cells stimulated with estrogen over a long period. Besides, some studies show that estrogen may have a role in the pathogenesis of hypertension (high blood pressure) and atherosclerosis. The findings of the current studies also show that the ET-1 level is affected in the endothelium cells stimulated by estrogen. This study has investigated the relationship between the effect of the 17b-estradiol on the gene endothelin-1 and the nitric oxide. In order to achieve this goal, three different estrogen-free medium were prepared from the cell cultures taken from the human umbilical endothelium cells. The first one was incubated without any E2 medium for 48 hours, and the second cell culture was stimulated with 10-7 M 17b-E2 for 48 hours. Having been exposed to the 10-7 M 17b-estradiol application in the first 24 hours, the last one was left to incubation with 1mM L-NAME (NOS inhibitor) for another 24-hour. Afterwards, the total RNA isolations were taken from the cells. RNA's, which were transferred to the nylon membrane with the technique of Northern Blot, were hybridized with ET-1 and GAPDH cDNA probes, which were marked as [a-32P] dCTP; and they were exposed to X-ray film. Then, during the comparison of the gene expressions of the specimens after their densitometrical measurement, it was observed that there was a 48% decrease in the gene expression of the cell culture stimulated with 10-7M E2, while the decrease in the gene expression of the cell culture stimulated with the 10-7M E2 and L-NAME was found to be 12%. The results of this thesis are significant since they show the relationship between the effect of the 17b-estradiol on the gene endotelin-1 and the nitric oxide, and the intermediary function (role) of 17b-estradiol in this process.