Monoklonal antı̇korların kromatografı̇k olarak saflaştırması

Abstract

Konu: Monoklonal antikorlar (mAb’lar), modifiye edilmiş proteinlerdir ve düzensiz olan sinyal iletim yolunun belirli bir bölümünü hedefleyerek insan vücudunda gerçekleşen immünolojik süreçlere müdahale ederler. Kanser tedavisi için saf mAb’lara ihtiyaç vardır. Amaç: Bu çalışmanın amacı, mAb’ların saflaştırmasını Protein A kromatografisi, katyon değişim/anyon değişim kromatografisi veya çoklu mod kromatografi ile gerçekleştirmektir. Yöntem: Protein A rezini ile olan saflaştırma, mAb’ın Fc bölgesi ile kolon matriksine immobilize edilmiş Protein A ligandları arasındaki spesifik bağlanma ile gerçekleştirildi. Çoklu mod kromatografi rezinleri kullanılarak yapılan saflaştırmada ise iyonik ve hidrofobik etkileşimleri aynı anda gerçekleştirebilecek gruplara sahip olması nedeniyle saflaştırma rezini ile mAb arasındaki çoklu bağlanma etkileşimleri ile gerçekleştirildi. Bulgular: Protein A saflaştırma basamağı ile elde edilen mAb ürününün farklı bir saflaştırma basamağı ile de elde edilebileceği gösterildi. Her iki saflaştırma basamağı sonrası elde edilen ürünlerin HPLC yöntemleri ile kalite profillerinin birbirine benzer olduğu saptandı. Sonuç: İki farklı saflaştırma yöntemi ile benzer mAb ürününün elde edilebileceği gösterildi. Protein A rezini ile gerçekleştirilen saflaştırma basamağının %Verim değeri diğer saflaştırma basamağına göre bir miktar daha fazlaydı. Bunun sebebi, Protein A rezininin IgG’nin Fc bölgesine spesifik bağlanma özelliği göstermesinden dolayı idi. Bu çalışma Marmara Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Komisyonu (Proje No: TYL-2022-10540) tarafından desteklenmiştir.