Publication: Bazı sübstitüe benzoik asit esterleri üzerine stabilite ve in vitro mikrozomal metabolizma çalışmaları
Abstract
ZET……………..................................................................................................... 3 2.SUMMARY .............................................................................................................. 4 3.Giriş VE AMAÇ .................................................................................................... 5 4. GENEL BLGLER................................................................................................ 7 4.1.laç Metabolizmasıyla lgili Metabolizması Çalısmalarının Gelisimi ................................................... 7 4.1.2. laç Metabolizması Arastırmalarıyla Neler Saptanabilir?............................ 9 4.1.3.laç Metabolizma Reaksiyonları ve lgili Enzimler....................................... 14 4.1.3.1 Faz I Reaksiyonları ....................................................................................... 17 4.1.3.2 Faz II Reaksiyonları...................................................................................... 18 4.1.4. laç Metabolizma Reaksiyonlarının Yerleri ................................................. 19 4.1.5. laç Metabolizmasını Etkileyen Faktörler .................................................... 19 4.1.6. laç Metabolizmasında Kullanılan In Vitro Teknikler................................ 24 4.1.6.1. Mikrozomal Preparatların Hazırlanması ve Standart Ko-faktör Karısımları................................................................................................................. 24 4.1.6.2. Karaciger Mikrozomal Preparatların Hazırlanması................................ 25 4.1.6.3. Standart Ko-faktör Karısımları ve Ön nkübasyon ................................. 25 4.1.6.4. nkübasyon ................................................................................................... 26 4.1.6.5. Biyolojik Sistemde Ekstraksiyon ve Evaporasyon.................................... 27 4.2. Ester Bilesikleri Hakkında Esterlerin Sentezleri: Esterlesme................................................................... 28 4.2.2. Fiziksel Özellikler............................................................................................ 29 4.2.3. Ester Metabolizmasının Kimyasal Mekanizması:........................................ 27 4.2.5. Farmakolojik Aktif Esterler .......................................................................... 29 4.2.5. Ester Bilesiklerinin Metabolizması................................................................ 33 5.DENEYSEL BÖLÜM (GEREÇ VE YÖNTEM)................................................. 39 5.1.Araç ve Gereçler.................................................................................................. 39 5.1.1.Kullanılan Kimyasal Maddeler....................................................................... 39 3 5.1.2.Kullanılan Elektronik Cihazlar ...................................................................... 39 5.2.Genel Sentez Yöntemleri .................................................................................... 40 5.2.1. etil 4-metoksi benzoat ..................................................................................... 40 5.3. Kromotografik Çalısmalar................................................................................ 37 5.3.1. nce Tabaka Kromotografisi.......................................................................... 37 5.3.2 Substrat ve Olası Metabolitlerin Yüksek Basınçlı Sıvı Kromotografisinde Tayini için Ön Çalısmalar ........................................................................................ 37 5.3.3 NMR (Nükleer Manyetik Rezonans) Spektroskopisi.................................... 38 5.4 Metabolizma Çalısmaları için Örneklerin Hazırlanması ve Deney Protokolü38 5.4.1. IN VITRO mikrozomal metabolizma çalısması ............................................ 38 5.4.1.1 Ön nkübasyon .............................................................................................. 39 5.4.1.2 nkübasyon .................................................................................................... 39 5.4.1.3 Ekstraksiyon ve Evaporasyon...................................................................... 44 6. BULGULAR.......................................................................................................... 44 6.1. Fiziksel, Kimyasal ve Spektroskopik Bulgular................................................ 44 6.1.1. NMR Spektroskopisi Çalısmalarına Ait Bulgular ....................................... 44 6.1.2. Yüksek Basınçlı Sıvı Kromotografisi Çalısmalarına Ait Bulgular............. 46 6.1.3. n vitro Biyotransformasyon Bulguları......................................................... 45 7. TARTISMA........................................................................................................... 55 8. SONUÇ................................................................................................................... 54 9. KAYNAKLAR ...................................................................................................... 55 10.ÖZGEÇMİŞ…………………………………………………………………….56 1.
Ester bilesikleri ilaç, gıda, kozmetik, araba ve ev dösemeciligi, bahçe hortumu, dus perdeleri, diyaliz ve kan naklinde kullanılan boru seti gibi tamamlanmıs plastiklerde ve boya endüstrisinde kullanılmaktadır (1,2,3,4). Ester bilesikleri hidroliz ile metabolize olmaktadır. Bu çalısma ile benzoik asit esterlerinin in vitro biyotransformasyonu incelenmistir. Çalısmanın birinci bölümünde karboksilik asit türevleri ile alkollerin esterlestirilmesiyle etil benzoat ve etil 4-metoksi benzoat bilesiginin sentezi yapıldı. Bilesigin saflıgı ince tabaka kromotografisi, Y.B.S.K., etil 4-metoksi benzoat bilesigi için ek olarak, 1H-NMR yöntemleri kullanılarak aydınlatılmıstır. Çalısmanın ikinci bölümünde ise, elde edilen bu bilesik ile birlikte etil benzoat ve etil 4-hidroksi benzoat bilesiklerinin, ters faz yüksek basınçlı sıvı kromatografisi yöntemi yardımı ile tüm metabolitlerin birbirinden ayrıldıgı uygun bir metot gelistirilmistir. Çalısmanın üçüncü bölümünde, her üç substrat, kalsiyum klorür çökeltme metodu ile daha önceden hazırlanmıs sıçan karaciger mikrozomal preparatları ile NADPH varlıgında inkübe edilip daha sonra inkübasyon karısımı, diklorometan ile sulu fazdan ekstrakte edildi ve diklorometanın su banyosunda 37°C sıcaklıkta çeker ocak altında buharlastırılmasıyla metabolik ekstratlar elde edilmistir. Çalısmanın son bölümünde ise, elde edilen metabolik ekstratların, ikinci bölümde gelistirilmis olan ters faz YBSK metodu kullanılarak analizleri yapıldı ve sonuçları belirtilmistir. Benzoik asit, ester, in vitro ester metabolizması 8 2.SUMMARY RESEARCH OF STABILITY AND IN VITRO MICROSOMAL METABOLIC OF SOME SUBSTITUED BENZOIC ACID ESTERS Ester compounds, which are metabolized through by hydrolysis, are used in pharma, nourishment, cosmetic and dye industry. This research analyzes in vitro biotransformation of the ester compounds of carboxylic acid. The first part of this study is a synthesis of the compounds of ethyl benzoate and ethyl 4-methoxy benzoate, after esterification of carboxylic acid derivatives and alcohols carboxylic acid derivatives with alcohols. In the second part, the produced esters would be used to develop a new method in order to distinguish all metabolites from each other with the help of High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) method. Purity of the compound was confirmed with thin layer chromatographic, HPLC and 1H-NMR methods. The third part aims to produce metabolic extracts for what? The process pursued for this result would be, first, the incubation of previously prepared rat liver microsomal preparators using calcium clorur sedimentation method in the presence of NADPH. Second, the incubated compound would be extracted from the liquid form with the help of diklorometan. Finally with the evaporation of the diklorometan involved in the compound under nitrogen gas the metabolic extracts would be produced. In the last part of the study the already produced metabolic extracts using the method developed in the second part according to HPLC method would be analyzed, and then, the results would be presented. Key Words: Benzoic Acid, Ester, In Vitro Ester Metabolism
Ester bilesikleri ilaç, gıda, kozmetik, araba ve ev dösemeciligi, bahçe hortumu, dus perdeleri, diyaliz ve kan naklinde kullanılan boru seti gibi tamamlanmıs plastiklerde ve boya endüstrisinde kullanılmaktadır (1,2,3,4). Ester bilesikleri hidroliz ile metabolize olmaktadır. Bu çalısma ile benzoik asit esterlerinin in vitro biyotransformasyonu incelenmistir. Çalısmanın birinci bölümünde karboksilik asit türevleri ile alkollerin esterlestirilmesiyle etil benzoat ve etil 4-metoksi benzoat bilesiginin sentezi yapıldı. Bilesigin saflıgı ince tabaka kromotografisi, Y.B.S.K., etil 4-metoksi benzoat bilesigi için ek olarak, 1H-NMR yöntemleri kullanılarak aydınlatılmıstır. Çalısmanın ikinci bölümünde ise, elde edilen bu bilesik ile birlikte etil benzoat ve etil 4-hidroksi benzoat bilesiklerinin, ters faz yüksek basınçlı sıvı kromatografisi yöntemi yardımı ile tüm metabolitlerin birbirinden ayrıldıgı uygun bir metot gelistirilmistir. Çalısmanın üçüncü bölümünde, her üç substrat, kalsiyum klorür çökeltme metodu ile daha önceden hazırlanmıs sıçan karaciger mikrozomal preparatları ile NADPH varlıgında inkübe edilip daha sonra inkübasyon karısımı, diklorometan ile sulu fazdan ekstrakte edildi ve diklorometanın su banyosunda 37°C sıcaklıkta çeker ocak altında buharlastırılmasıyla metabolik ekstratlar elde edilmistir. Çalısmanın son bölümünde ise, elde edilen metabolik ekstratların, ikinci bölümde gelistirilmis olan ters faz YBSK metodu kullanılarak analizleri yapıldı ve sonuçları belirtilmistir. Benzoik asit, ester, in vitro ester metabolizması 8 2.SUMMARY RESEARCH OF STABILITY AND IN VITRO MICROSOMAL METABOLIC OF SOME SUBSTITUED BENZOIC ACID ESTERS Ester compounds, which are metabolized through by hydrolysis, are used in pharma, nourishment, cosmetic and dye industry. This research analyzes in vitro biotransformation of the ester compounds of carboxylic acid. The first part of this study is a synthesis of the compounds of ethyl benzoate and ethyl 4-methoxy benzoate, after esterification of carboxylic acid derivatives and alcohols carboxylic acid derivatives with alcohols. In the second part, the produced esters would be used to develop a new method in order to distinguish all metabolites from each other with the help of High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) method. Purity of the compound was confirmed with thin layer chromatographic, HPLC and 1H-NMR methods. The third part aims to produce metabolic extracts for what? The process pursued for this result would be, first, the incubation of previously prepared rat liver microsomal preparators using calcium clorur sedimentation method in the presence of NADPH. Second, the incubated compound would be extracted from the liquid form with the help of diklorometan. Finally with the evaporation of the diklorometan involved in the compound under nitrogen gas the metabolic extracts would be produced. In the last part of the study the already produced metabolic extracts using the method developed in the second part according to HPLC method would be analyzed, and then, the results would be presented. Key Words: Benzoic Acid, Ester, In Vitro Ester Metabolism