Lamivudin ve benzeri antiviral tedavisi almamış asemptomatik hepatit B taşıyıcısı ve kronik B hepatit’li hastalarda YMDD motif mutasyonları saptanması ve genotip tayini yapılması

Abstract

Lamivudin (LAM) tedavisi almış kronik hepatit B (KHB)'li hastalarda, YMDD mutasyonlarının ortaya çıktığı iyi bilinmektedir. Ancak LAM. tedavisi almamış KHB'li hastalarda ve özellikle asemptomatik taşıyıcılarda spontan YMDD mutasyonlarının varlığı hakkındaki çalışmalar sınırlıdır. Bu çalışma lamivudin ve benzeri antiviral tedavisi almamış asemptomatik hepatit B taşıyıcısı ve KHB'li hastalarda, YMDD mutasyonları ve HBV genotiplerini saptamak ve mutasyonlarla genotipler arasında bir ilişki olup olmadığını araştırmak amacıyla, Marmara Üniversitesi Tıp Fakültesi Gastroenteroloji Bilim Dalı işbirliği ile Marmara Üniversitesi Gastroenteroloji Enstitüsü'nde planlanmış ve enstitünün moleküler biyoloji laboratuarında yapılmıştır. Bu amaçla çalışmaya tedavi almamış en az bir yıldır serum ALT (Alanin aminotransferaz) düzeyi normal ve Digene kitiyle serum HBV DNA'sı negatif olan 41 asemptomatik taşıyıcı ve 17 KHB'li hasta alındı. HBV DNA, HBV genotipleri, ve polimeraz gen mutasyonları sırasıyla nested PZR, PZR-RFLP ve Innogenetics, INNO-LIPA HBV DR kiti ile tayin edildi. 41 asemptomatik taşıyıcının 25'inde (%60,9) nested PZR ile HBV DNA pozitif saptandı. YMDD mutasyonları 25 hastanın 7'sinde (%28) saptandı. KHB hastalarında YMDD mutasyonu saptanmadı. L528M mutasyonu ise asemptomatik taşıyıcı 25 hastanın 10'unda (%40), KHB hastalarının ise 2' sinde tespit edildi. Asemptomatik hastaların 6'sında, genotipe spesifik PZR ile DNA saptanmadı. Genotip tayini yapıldığında; 7 hastada daha önce tanımlanmamış patternler saptandı. Diğer hastalarda HBV 'D' genotipinin D1, D2 ve D6 paternleri saptandı. Sonuç olarak bu çalışma gösteriyor ki: YMDD motif mutasyonları, lamivudin tedavisi almamış asemptomatik taşıyıcı hastalarda da vardır. Tedavi almamış KHB hastalarında sadece L528M mutasyonu saptanmıştır. Tanımlanmamış paternlerle, YMDD mutasyonları arasındaki bir ilişkinin olup olmadığını göstermek için yeni çalışmalara ihtiyaç vardır. DETECTION OF YMDD MUTATIONS AND HEPATITIS B VIRUS (HBV) GENOTYPES IN PATIENTS WITH CHRONIC HEPATITIS B AND ASYMPTOMATIC HBV CARRIERS WHO DID NOT UNDERGO ANY ANTIVIRAL TREATMENT. Emergence of YMDD mutations in patients with chronic hepatitis B (CHB) who underwent lamivudine therapy is a well known fact. However, the studies about the presence of spontaneous YMDD mutations in patients with CHB and especially in asymptomatic carriers who were not treated with lamivudine are limited. This study was carried out at Marmara University Gastroenterology Institute (M. U. G. I.) in collaboration with Marmara University School of Medicine, Department of Gastroenterology in patients with CHB and asymptomatic HBV carriers who had not undergone any antiviral treatment. The aim of this study is to determine YMDD motif mutations and HBV genotypes and to investigate whether there is a connection between mutations and HBV genotypes in this group of patients. Forty-one asymptomatic HBV carriers who maintained normal ALT (Alanine aminotransferase) values for one year and have negative serum HBV DNA with Digene kit and seventeen patients with CHB, were included into the study. HBV DNA, HBV genotypes and YMDD mutations were investigated by nested PCR, PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism), INNOGENETİCS INNO-LiPA HBV DR kits, respectively. HBV DNA was detected in 25 (%60,9) of 41 asymptomatic carriers by nested PCR. YMDD mutations were detected in 7 (%28) of 25 patients. L528M mutation was detected in 10 of 25 asymptomatic carriers and 2 of 17 patients with CHB. HBV DNA was not detected in six asymptomatic carriers by PCR of the specific to HBV genotypes. When HBV genotypes were determined, unpredicted patterns were detected in seven patients. Three different patterns (D1, D2, and D6) of HBV D genotype were detected in the other patients. As a result, the present study demonstrates that YMDD mutant viruses are also present in lamivudine-untreated asymptomatic HBV carriers. Only L528M mutation was detected in patients with CHB who were not treated with lamivudine. New studies are needed to show as to whether there is a connection between unpredicted paterns and YMDD mutations.