Quorum sensıng inhibisyonunun pseudomonas aerugınosa’da floresan ışıma ve krt-pzr yöntemleri kullanılarak kantitatif olarak karşılaştırılması

Abstract

QUORUM SENSING İNHİBİSYONUNUN PSEUDOMONAS AERUGINOSA’DA FLORESAN IŞIMA VE KRT-PZR YÖNTEMLERİ KULLANILARAK KANTİTATİF OLARAK KARŞILAŞTIRILMASI Mikroorganizmaların geliştirdikleri antibiyotik dirençleri son yıllarda sağlık açısından önemli bir tehdit oluşturmaktadır. Bağışıklık yetersizliği olan kişilerde yaralı dokuları kolayca enfekte edebilen fırsatçı patojenlerden Pseudomonas aeruginosa, bu mikroorganizmalar arasında yer almaktadır. P. aeruginosa, ürettiği ekzopolisakkaritler ile biyofilm oluşturarak ilaç ve dezenfektanlara karşı koyabilmektedir. Biyofilm oluşumundaki en önemli etkenlerden birinin Quorum Sensing (QS) mekanizması olduğu bilinmektedir. Sinyal molekülleri ile çalışan QS mekanizmasının bloke edilmesi ile bakterilerin iletişimi sekteye uğratılabilmekte ve biyofilm oluşturmaları engellenerek daha savunmasız kalmaları sağlanabilmektedir. Bu çalışmada bir liken sekonder metaboliti olan evernik asitin, antibiyotik maddelere alternatif veya yardımcı olabilecek, P. aeruginosa üzerinde etkili Quorum Sensing İnhibitörü (QSI) özelliklerinin belirlenmesi hedeflenmiştir. Bu bağlamda, sekonder metabolitlerin moleküler düzeyde QS bağlantılı gen ekspresyonuna etkisinin floresan protein ışıma yöntemi ile incelenmesi ve elde edilen verilerin kRT-PZR sonuçları ile karşılaştırılması amaçlanmıştır. Ekspresyon ve QSI analizleri için kRT-PZR metoduyla birlikte canlı biyosensör hücreler aracılığıyla in vivo ölçüme izin veren, GFP temelli floresan ışıma yöntemi kullanılmıştır. Böylece gen anlatımının ve bağlantılı olarak QS mekanizmasının inhibisyonunun gerçek zamanlı izlenmesi ve yöntemlerin karşılaştırılması ayrıca hedeflenmiştir. QSI taramaları sonucunda evernik asitin belirli konsantrasyonlarında QS bağlı lasB ve rhlA genlerinin ekspresyonlarını inhibe ettiği gözlenmiştir. Elde edilen sonuçlar ile P. aeruginosa üzerinde QSI özellikli doğal maddelerin belirlenmesi açısından kantitatif iki yöntem karşılaştırılmıştır. QSI ve ilgili gen ekspresyonları üzerinde etkili olabilecek koşul veya maddeler ile ilgili çalışmalarda floresan biyosensör suşların kullanılmasının kolaylık sağlayabileceği anlaşılmıştır. Ayrıca elde edilen evernik asit inhibisyon değerleri ile antibiyotiklere yardımcı ilaç geliştirme çalışmaları için ön araştırmalar ortaya çıkarılmıştır. alternatif veya yardımcı olabilecek, P. aeruginosa üzerinde etkili Quorum Sensing İnhibitörü (QSI) özelliklerinin belirlenmesi hedeflenmiştir. Bu bağlamda, sekonder metabolitlerin moleküler düzeyde QS bağlantılı gen ekspresyonuna etkisinin floresan protein ışıma yöntemi ile incelenmesi ve elde edilen verilerin kRT-PZR sonuçları ile karşılaştırılması amaçlanmıştır. Ekspresyon ve QSI analizleri için kRT-PZR metoduyla birlikte canlı biyosensör hücreler aracılığıyla in vivo ölçüme izin veren, GFP temelli floresan ışıma yöntemi kullanılmıştır. Böylece gen anlatımının ve bağlantılı olarak QS mekanizmasının inhibisyonunun gerçek zamanlı izlenmesi ve yöntemlerin karşılaştırılması ayrıca hedeflenmiştir. QSI taramaları sonucunda evernik asitin belirli konsantrasyonlarında QS bağlı lasB ve rhlA genlerinin ekspresyonlarını inhibe ettiği gözlenmiştir. Elde edilen sonuçlar ile P. aeruginosa üzerinde QSI özellikli doğal maddelerin belirlenmesi açısından kantitatif iki yöntem karşılaştırılmıştır. QSI ve ilgili gen ekspresyonları üzerinde etkili olabilecek koşul veya maddeler ile ilgili çalışmalarda floresan biyosensör suşların kullanılmasının kolaylık sağlayabileceği anlaşılmıştır. Ayrıca elde edilen evernik asit inhibisyon değerleri ile antibiyotiklere yardımcı ilaç geliştirme çalışmaları için ön araştırmalar ortaya çıkarılmıştır.