İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü (HIV) Enfeksiyonu_x000D_ Tanısında Enzim ‘Immunoassay’ (EIA), İmmünoblot_x000D_ ve HIV RNA Polimeraz Zincir Reaksiyonu Test_x000D_ Sonuçlarının Değerlendirilmesi

Abstract

Kazanılmış immün yetmezlik sendromu (AIDS) önemli bir küresel halk sağlığı sorunudur. Her yıl bildirilenHIV/AIDS olgularının sayısı artmakta ve bu durum ülkemiz için önemli bir sağlık sorunu haline gelmektedir.İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV) enfeksiyonlarının laboratuvar tanısında ilk basamak olan dördüncü kuşakenzim “immunoassay (EIA)” testinin tekrarlayan şekilde reaktif bulunması halinde doğrulama testi olarakimmünoblot (IB), “line immunoassay (LIA)”, HIV 1-2 antikor ayırt edici hızlı testler gibi antikora dayalı testlerve enfeksiyonun erken dönemi için HIV RNA saptayan testler kullanılmaktadır. Bu çalışmada, HIV enfeksiyonunun tanısında kullanılan üç farklı yöntemin sonuçlarının birlikte değerlendirilmesi ve yorumlanması amaçlanmıştır. Akdeniz Üniversitesi Hastanesi Merkez Laboratuvarında, Ocak 2010 ve Aralık 2015 tarihleri arasındaHIV 1-2 Ab+Ag EIA test sonucu reaktif ya da gri zon olarak saptanan 199 hastaya ait örneklerde HIV 1-2 AbIB ve kantitatif HIV-1 RNA polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) testleri çalışılmıştır. Serum örneklerinde HIV 1-2Ab+Ag tayini elektrokemilüminesans EIA yöntemi (Elecsys HIV combi PT test, Roche Diagnostics, Almanya)ile yapılmış, HIV 1-2 IB yönteminde ticari bir kit (INNO-LIA HIV I/II Score, Innogenetics, Belçika) kullanılmıştır.HIV-1 RNA varlığı plazma örneklerinde otomatize nükleik asit ekstraksiyonu ve gerçek zamanlı PCR yöntemi(Ampliprep/COBAS Tagman HIV-1 Test, Roche Diagnostics, Almanya) ile araştırılmıştır. İstatistiksel analiz için veriler SPSS’ye kaydedilmiş, Mann-Whitney U testi kullanılmış ve ROC analizi yapılmıştır, p< 0.05 değerlerianlamlı kabul edilmiştir. Örneklerin HIV 1-2 Ab+Ag EIA testinin ortanca COI (cut-off indeks) değerleri; HIV1-2 IB ve HIV-1 RNA testlerinin birlikte pozitif olması durumunda, HIV 1-2 IB ve HIV-1 RNA testlerinin birliktenegatif olması durumuna göre anlamlı olarak daha yüksek çıkmıştır [sırasıyla; 394 (aralık: 11.5-2272) ve1.79 (aralık: 1.01-83.3), p< 0.001]. HIV 1-2 IB test sonucu greyzon olan bir hasta ve negatif olan iki hastadaHIV-1 RNA pozitifliği saptanmıştır (viral yük sırasıyla; > 10.000.000, > 10.000.000 ve 5.040.000 kopya/ml). HIV 1-2 Ab+Ag EIA COI değerinin, kullandığımız kit için 16.45’ten büyük olmasının HIV enfeksiyonunugöstermede duyarlılığı %97.6, özgüllüğü %98.1, pozitif prediktif değeri (PPD) %97.6 ve negatif prediktifdeğeri (NPD) %98.1 olarak hesaplanmıştır (r= 0.994, p< 0.001). HIV 1-2 Ab+Ag EIA COI değerinin 9.26’danküçük olmasının ise duyarlılığı %100, özgüllüğü %92.5, PPD’si %91.1 ve NPD’si %100 olarak bulunmuştur(p< 0.001). HIV 1-2 Ab+Ag EIA test sonucu tekrarlayan reaktif olup; HIV 1-2 IB testi ve HIV-1 RNA testlerininde pozitif olması HIV enfeksiyonu tanısını koydurmaktadır. Çalışmamızda bu grup hastalarda HIV 1-2 Ab+AgEIA testinin COI ortanca değeri 394 (aralık: 11.5-2272) çıkmıştır (p< 0.001). HIV EIA testi tekrarlayan reaktifve HIV IB testi gri zon saptanan bir hastada ve negatif saptanan iki hastada (HIV EIA COI değerleri sırasıyla;265.0, 9.5 ve 131.8) HIV-1 RNA PCR testi ile pozitiflik (HIV-1 RNA sırasıyla; > 10.000.000, 5.040.000 ve >10.000.000 kopya/ml) saptanmıştır. Bu olgular klinik ve laboratuvar bulguları ile akut HIV enfeksiyonu tanısıalmışlardır. Akut HIV enfeksiyonu düşünüldüğünde mutlaka HIV RNA’nın da çalışılması ve tanı algoritmasındayer alması gerekmektedir.

Acquired Immunodeficiency syndrome (AIDS) is an important global public health issue. Increasing_x000D_ HIV/AIDS cases reported each year has become a serious health problem for our country. The fourth_x000D_ generation enzyme immunoassay (EIA) test is the first step in the laboratory diagnosis of human immunodeficiency virus (HIV) infection. When the EIA test is repeatedly reactive, antibody-based tests such as_x000D_ immuno blot (IB), line immunoassay (LIA), HIV 1-2 antibody differentiation immunoassay, and HIV RNA_x000D_ tests for the early period of infection are used as confirmatory tests. The aim of this study was to evaluate_x000D_ the results of three different methods for the diagnosis of HIV infection. HIV 1-2 IB and quantitative HIV-1_x000D_ RNA PCR tests were performed in 199 patient samples. These samples were detected as the reactive or_x000D_ gray zone with HIV 1-2 Ab+Ag EIA test between 2010 and 2015 at Akdeniz University Hospital, Microbiology Laboratory. HIV 1-2 Ab+Ag determination in serum samples was performed with the EIA method_x000D_ (Elecsys HIV combi PT test, Roche Diagnostics, Germany). A commercial kit (INNO-LIA HIV I-II Score,_x000D_ Innogenetics, Belgium) was used for HIV 1-2 IB method. The presence of HIV-1 RNA was investigated by_x000D_ automated nucleic acid extraction and real-time PCR method (Ampliprep/COBAS Tagman HIV-1 Test,_x000D_ Roche Diagnostics, Germany) in plasma samples. For statistical analysis, SPSS, Mann Whitney U test was_x000D_ used, ROC analysis was performed and p< 0.05 value was considered statistically significant. HIV 1-2_x000D_ Ab+Ag EIA COI (cut-off index) median value was higher with positive HIV 1-2 IB and HIV-1 RNA results_x000D_ than negative HIV 1-2 IB and HIV-1 RNA results. These values were 394 (range: 11.5-2272) and 1.79_x000D_ (range: 1.01-83.3) respectively and this difference was statistically significant (p< 0.001). HIV-1 RNA test_x000D_ results were positive in one patient with gray zone and two patients with negative HIV 1-2 IB result (viral_x000D_ loads were > 10.000.000, > 10.000.000 and 5.040.000 copies/ml, respectively). For the kit that we used_x000D_ for HIV 1-2 Ab+Ag EIA COI ratio of >16.45 had a sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV) and_x000D_ negative predictive value (NPV) of 97.6%, 98.1%, 97.6% and 98.1%, respectively for the detection of_x000D_ HIV infection (r= 0.994, p< 0.001). HIV 1-2 Ab+Ag EIA S/CO ratio of < 9.26 had a sensitivity, specificity,_x000D_ PPV and NPV of 100%, 92.5%, 91.1% and 100% (p< 0.001). HIV infection is diagnosed if HIV 1-2 Ab+Ag_x000D_ EIA test result is repeatedly reactive and HIV 1-2 IB test and HIV-1 RNA tests are positive. In our study, HIV_x000D_ 1-2 Ab+Ag EIA COI median value was 394 (range: 11.5-2272) in this group of patients (p< 0.001). HIV-1_x000D_ RNA PCR test was positive in three patients with > 10.000.000, 5.040.000 and > 10.000.000 copies/ml_x000D_ whose EIA tests were repeatedly reactive. HIV IB test was detected as the gray zone in one of them and_x000D_ as negative in the remaining two (HIV EIA S/CO values were 265, 9.5 and 131.8, respectively). These_x000D_ patients were diagnosed as acute HIV infection with clinical and laboratory findings. In conclusion, HIV_x000D_ RNA should also be performed and included in the diagnostic algorithm for acute HIV infection.