Bazı bitki ekstrelerinin karaciğer HepG2 hücrelerinde yağ birikimi üzerine etkisi : AMPK-yolunun rolü

Abstract

Amaç: Crataegus Orientalis, Rubus discolor, Rubus sanctus ve Myrtus communis Linnaeu ekstreleri ve melatoninin HepG2 hücrelerinde oleik asitle (OA) indüklenen nonalkolik yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD) modelinde yağ birikimi üzerine etkileri ve bu etkilerde AMPaktive protein kinazın (AMPK) rolü incelenmiştir. Gereç ve Yöntem: OA 200 µmol/ L, 500 µmol/ L ve 1000 µmol/ L konsantrasyonlarda HepG2 hücrelerine eklendi. Yağ birikimini sağlayacak konsantrasyonu bulmak için Oil-Red boyama yapıldı, intraselüler trigliserid düzeyleri ölçüldü. Ekstrelerin hücre canlılığına etkileri MTT ile değerlendirildi. En uygun yağ konsantrasyonuyla ekstrelerin ve pozitif kontrol olan melatoninin yağ birikimine etkisi incelendi. Intraselüler kolesterol ve TNFα düzeyleri ölçüldü. Yağ sentezinde görevli Asetil KoA karboksiklaz (ACC1), yağ asit sentaz (FAS), sterol düzenleyici element bağlayan protein 1 (SREBP-1) ve yağ yıkımında rolü olan fosfoAMPK mRNA düzeyleri RT-PCR ile değerlendirildi.Bulgular: HepG2 hücrelerinde 24 saatte en iyi yağ birikimi 1000 µmol/ L OA ile sağlandı. Crataegus Orientalis (COE, 100 µmol/ L), Rubus discolor (RDE, 50 µmol/ L; 100 µmol/ L), Myrtus communis Linnaeus (MCE, 100 µmol/ L) ekstreleri ve melatoninin (10 µmol/ L) yağ birikiminde anlamlı düzeyde azalmaya neden olduğu gözlendi. Ekstrelerin hücre içi kolesterol düzeylerinde ve TNFα düzeylerinde azalmaya neden oldu ancak bu azalmalar istatistiki olarak anlamlı bulunmadı. COE, OA ile indüklenen ACC1, FAS ve SREBP-1 gen ekpresyonlarını baskıladı. MCE, ACC1 ve FAS gen ekpresyonlarını baskıladı. RDE, gen düzeylerinde anlamlı düzeyde azalmaya neden olmadı. Her üç ekstre fosfoAMPK gen düzeylerinde değişikliğe neden olmadı. Sonuç: Bulgularımız her üç ekstrenin NAFLD önlenmesinde/ tedavisinde potansiyel bir terapötik etkileri olabileceğini gösterilmiştir. HepG2, non-alkolik karaciğer yağlanması, oleik asit, yağbirikimi, adenozin monofosfat kinazAim: To invastigate the effects of Crataegus Orientalis, Rubus discolor, Rubus sanctus, Myrtus communis Linnaeu extracts and melatonin on oleic acid(OA)-induced lipid accumulation in HepG2 cells in nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) model and role of AMPactivated protein kinase (AMPK) in these effects. Materials and Methods: OA was added to HepG2 cells (200, 500 and 1000 µmol/ L). To find best concentration for lipid accumulation, Oil-Red staining and intracellular triglyceride were measured. Effects of extracts and melatonin as positive control on cell viability were evaluated by MTT; their effects on lipid accumulation was investigated by appropriate lipid concentration. Intracellular cholesterol and TNFα were measured. mRNA levels of Acetyl CoA carboxyclase (ACC1), fatty acid synthase (FAS), sterol regulatory element binding protein 1 (SREBP-1), which are involved in lipid synthesis and phospho AMPK, which plays a role in lipid breakdown, were evaluated by RT-PCR. Results: The best lipid accumulation in 24 hours in HepG2 was achieved with 1000 µmol/ L OA. Crataegus Orientalis (COE, 100 µmol/ L), Rubus discolor (RDE, 50 µmol/ L, 100 µmol/ L), Myrtus communis Linnaeus (MCE, 100 µmol/ L), melatonin (10 µmol/ L) caused significant decrease in lipid accumulation. Extracts didn’t caused a statistically significant decrease in intracellular cholesterol and TNFα levels. COE suppressed ACC1, FAS and SREBP-1. MCE suppressed ACC1 and FAS. RDE didn’t cause a significant decrease in gene levels. Extracts didn’t provide changes in phosphoAMPK. Conclusion : All three extracts may have potential therapeutic effects in prevention/ treatment of NAFLD. Key Words: HepG2, non-alcoholic fatty liver, adenosine monophosphate kinase, oleic acid, lipid accumulation