Deuterium'un azaltılmış suyun in vitro fibrinojen oksidasyonuna antioksidan ve mononükleer hücrelere apoptotik etkisinin incelenmesi

Abstract

DEUTERİUM’U AZALTILMIŞ SUYUN İN VİTRO FİBRİNOJEN OKSİDASYONUNA ANTİOKSİDAN VE MONONÜKLEER HÜCRELERE APOPTOTİK ETKİSİNİN İNCELENMESİ Burcu Ersoy Bu çalışmada, deuterium azaltılmış suyun( DDW) plazma proteinlerinden olan fibrinojenin Kloramin-T ile in vitro oksidasyonuna karşı koruyucu etkisi olup olmadığını araştırmak çalışmamızın ilk bölümünü oluşturmuştur. Oksidasyon sırasında 30 ppm DDW ve 150 ppm DW ile oksidan şiddeti karbonil miktarı tayini ile takip edilmiştir. Karbonil tayininde spektrofotometrik ölçümdeki değerler 150 ppm deuterium içeren suda 7,73±0,18 nmol karbonil/ mg protein iken, 30 ppm deuterium içeren suda 4,54±1,23 nmol karbonil / mg protein (n=7)olarak bulunmuştur. Çalışmamızın ikinci bölümünde, oksidasyona uğratılan fibrinojen molekülüne farklı konstrasyonlarda DDW’nin(30 ppm, 90 ppm ve 150 ppm) protein yapısı üzerine etkisi HPLC analizi ile incelendi. Pik alanları ve retention time değişiklikleri değerlendirildi. Kloramin-T ile modifikasyon ve DDW’li çözeltilerle incelendi. Değerlendirmede eluatların retention time 10. ve 11. Dakikalarındaki % alan değişiklikleri öne çıkmıştır. Çalışmamızın üçüncü bölümünde bir sağlıklı gönüllüden elde edilen tam kanda flov sitometrik çalışma yapıldı. Bu yöntemle mononükleer hücrelerdeki apoptoza 135 ppm ve 150 ppm konsatrasyonudaki deuterium ihtiva eden DDW’in zaman bağlı (0. 30.dak, 2.saat ve 6.saat) etkisi incelendi. 135 ppm’lik DDW’i konsantrasyonunun bu hücreler üzerindeki apoptoza nötr etki yarattığı görüldü. Deuterium azaltılmış su, fibrinojen, Kloramin-T, HPLC, flov sitometri Antioxidant Effect of Deuterium Depletion on in vitro Fibrinogen Oxidation and its effect on Apoptosis of Mononuclear Cells Burcu Ersoy In this study, deuterium-reduced water (DDW) is the plasma protein fibrinogen in vitro oxidation of the chloramine-T and whether to investigate the protective effect in the first part of our work has created. During the oxidation with 30 ppm DDW and 150 ppm DW Determination of the amount of oxidant and carbonyl intensity were followed. Oxidant effects on protein radicals tracking methods was analyzed as a marker of oxidant stress on fibrinogen molecule in the literature as one of the most important that the determination was done with the amount carbonyl measure metod. In the measurents Carbonyl Metod spectrophotometric analysis was dedected fibrinogen carbonyl concenration was lower in DDW(30 ppm) than in DW(150 ppm) (4.54±1.23 18 nmol/ mg protein, 7.73.±0.18 nmol/ mg protein(n=7). In second part of our study, the eluation of exposure of fibrinogen added different consentration of deuterium depleted water (30 ppm,90 ppm and 150 ppm) . We detected peak and area eluting within 10.min. and 11.min after fibrinogen modification. In the third part of our study of healthy volunteers, effect of decreased deuterium contents of incubation media of mononuclear cells from human whole blood were analysed for apoptosis levels on flow cytometry where cells were incubated either with distilled water (DW) or DDW for different time periods prior to staining with AnnexinV for measuring apoptosis. Applied on these cells of 30 ppmlik DDW'i consentration was apoptosis is neutral effect. Deuterium Depleted water, fibrinogen, Chloramin-T, HPLC, Flow cytometry