Publication:
Aşı Prototipi ve Tanı kiti Uygulama Amaçlı Q Humma Hastalığına Karşı Lipopolisakkarit-Biyopolimer Kompleks ve Konjugatlarının Geliştirilmesi

Research Projects

Organizational Units

Journal Issue

Abstract

Biyopolimerlerin lipopolisakkarit, protein ve diger biyomoleküllerle kompleks ve konjugasyonutıp, eczacılık, biyoteknoloji ve biyomühendislik alanlarında uygulamalar için çesitli yeniliklergetirmektedir. Son zamanlarda polimer-biyomolekül kompleks ve konjugatları proteinlerinsaflastırılması, enzim kararlılıgının arttırılması, yeni nesil ası sistemleri, tanı kitleri, biyosensörüretimi kontrollü ilaç salımı ve doku mühendisliginde kullanılmaktadırlar.Q hummanın etiyolojik ajanı lipolisakkarit yapısındaki Coxiella burnetii dir. Q humması Dünyada en sık görülen riketsiyal kaynaklı zoonotik bir hastalıklardandır. Insanlarda meydanagetirecegi kalıcı enfeksiyonlar Q hummasının kronik formuna yol açabilir ve sıklıkla ölümcülolabilmektedir. Ancak bu hastalıga karsı sentetik ası gelistirilmesine zemin hazırlayacak olanPolimer-Lipopolisakkarit kompleks ve konjugatları gelistirilmesi ile ilgili herhangi bir çalısmabulunmamaktadır.Projemiz kapsamında ilk 6 aylık asamada Slovakya tarafından Coxiella burnetiilipopolisakkaritinin izolasyonu gerçeklestirilmis, karakterizasyonu ve fonksiyonel özellikleriincelenerek tarafımıza saf bir sekilde verilmistir. Türkiye tarafında ise, bu ilk 6 aylık dönemdepolimerlerin [Polioksidonyum, Poli(vinilpirolidon-co-akrilikasid)] sentezi yapılmıstır. Dahasonraki 1 yıllık asamada; Biyopolimerler ve lipopolisakkarit kullanılarak, (1)fiziksel karısımlaPolimer-lipopolisakkarit kompleksleri, (2)Bakır metal iyonu aracılıgı ile üçlü Polimer-Bakırlipopolisakkaritkompleksleri ve (3)çapraz baglayıcıyla konjugatlar olusturulmus vekarakterizasyonları gerçeklestirilmistir.Ikinci 1,5 yıllık bir sürede hazırlanan bu kompleks ve konjugatlar Balb/c farelere enjekteedilerek ELISA metoduyla antikor seviyeleri saptanmıstır. Alınan en iyi antikor seviyesioranındaki kompleks ve konjugatımızın ası prototipi olarak tespiti yapılmıstır. En yüksekdüzeyde antikor ürettigi tespit edilen Balb/c Hibridoma teknolojisi ile monoklonal antikor eldesiçalısmalarında kullanılmıstır. Coxiella burnetii ye karsı elde edilen bu monoklonal antikorlatanı kiti denemesi gerçeklestirilmis ve hastanın serumundan hastalık basarılı bir sekilde tespitedilmistir.Projemizden elde edilen çıktılar ile yeni tip ası ve tanı kiti prototipleri üretilmistir. Gelecektekiasamada destek bulunarak patentlerinin alınmasıyla Biyoteknoloji ve Genetik Mühendisligitekniklerini kullanarak yapılan ilklerden olan ası ve teshis amaçlı bir kit olarak ticarilestirmeçalısmalarının yapılması planlanmaktadır. Yapılan bu çalısmanın farklı hastalıklar için deüretilecek ası ve tanı kitlerinin yapımına alt yapı, bilgi, birikim açısından büyük katkısıolacagını ve ülkemizin dısa bagımlılıgını ortadan kaldırılacagını düsünmekteyiz.
Conjugation of biopolymers with lipopolysaccharides, peptides, proteins and otherbiomolecules is used in medicine, pharmaceuticals, biotechnology and bioengineeringapplications to bring various novelties. Aside non-water soluble polymeric systems used infunctional applications such as controlled drug release, tissue engineering; water solublePolymer-biomolecule complexes and conjugates recently have been used in proteinpurification, increasing enzyme stability, drug release systems, new generation vaccinesystems, diagnostic kits, production of biosensors, controlled drug release, tissueengineering.Coxiella burnetii is the etiologic agent of Q fever. This lipopolysaccharide is the mostwidespread rickettsia sourced zoonotic disease. Permanent infections in humans can causechronic form of Q fever to arise, endocarditis induced with Coxiella burnetii often resultsfatally. However, there are no studies to form a ground for development of synthetic vaccinesfor this illness using polymer-lipopolysaccharide complexes and conjugates.Within the scope of our project, isolation of Coxiella burnetii lipopolysaccharide wasperformed and the characterization and functional properties was investigated and weregiven purely to us by Slovakia during the first 6 months. In the Turkish side, we hadsynthesized polymers [Polyoxidonium, Poly (vinylpyrrolidone-co-acrylic acid)] in the first 6months. In the next 1 year stage using biopolymers and lipopolysaccharide; polymerlipopolysaccharidecomplexes using physical mixtures(1), polymer-copper-lipopolysaccharidecomplexes via copper metal ion(2) and cross-linker conjugates(3) were formed andcharacterized.In the second half and a year stage, these complexes and conjugates were injected intoBalb/c mice and antibody levels were determined by ELISA method. We have determinedthat the best antibody level ratio of the complex and conjugate is the vaccine prototype. TheBalb/c which was found to produce the highest level of antibody, has been used inmonoclonal antibody production studies with hybridoma technology. A diagnostic kit test wasperformed with this monoclonal antibody against Coxiella burnetii and the patient's diseasewas successfully diagnosed.New types of vaccine and diagnostic kit prototypes have been produced with outputs fromour project. It is planned to carry out the commercialization studies as a kit for vaccinationand diagnosis, which is supported by the future stage and is obtained from the patents andxixbiotechnology and genetic engineering techniques. We think that this study will be a greatcontribution to the construction of vaccines and diagnostic kits to be produced for differentdiseases and will eliminate the foreign dependency of our country.

Description

Keywords

Kimya, Tıbbi, Malzeme Bilimleri, Biyomalzemeler, Mikrobiyoloji, Polimer Bilimi

Citation